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细粒棘球绦虫Eg18抗原表位预测
目的 通过生物信息学技术预测细粒棘球绦虫Eg18抗原B、T细胞表位,为细粒棘球绦虫筛选具有保护性抗原表位的抗原提供理论基础.方法 使用Expasy系统预测理化性质;二、三级结构的预测使用在线预测网站Predict Protein;通过在线软件ABCpred、LEPS结合二级结构、亲水性指数、表面可及性指数、柔韧性指数对B细胞表位进行预测;应用SYFPEITHI及IEDB软件预测MHC-Ⅰ类HLA-A0201限制性T细胞表位.结果 Eg18抗原二级结构中α-螺旋结构占氨基酸残基总数的98.1％,无规则卷曲占1.9％,无β-折叠结构;选出具有优势的30 ～41、55～71、110 ～126、136～ 144四个可能为Eg18蛋白B细胞表位的氨基酸序列区域;17 ～ 27、32 ～ 41、61～72、96 ～105四个较有可能形成T抗原表位的氨基酸序列区域.结论 通过生物信息学预测Eg18抗原可能有4个B细胞表位且为构象表位,有4个T抗原表位,可为进一步了解Eg18抗原提供参考.
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细粒棘球绦虫Eg18基因的克隆表达和重组抗原免疫检测的初步评价
目的 克隆、表达细粒棘球绦虫Eg18基因,评价重组蛋白的免疫反应性.方法 根据已知Eg18基因序列,利用RT-PCR方法从青海绵羊肝棘球蚴原头节提取的总RNA中扩增目的基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,转化大肠埃希菌BI21 (DE),IPTG诱导表达.表达产物经亲和层析纯化,用免疫印迹试验(Western blot)和酶联免疫吸附试验(ELISA)初步评价其与棘球绦虫及其他蠕虫感染血清的反应性.结果 RT-PCR扩增产物编码的蛋白质序列与GenBank中的Eg18和Em18完全相同.重组蛋白与多种蠕虫病人血清中的IgG和IgG4均有交叉反应,但检测IsG4时,与其他蠕虫的交叉反应显著降低.结论 Eg18/Em18是细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的共同抗原,其特异性IgG4是泡型棘球蚴病较特异的诊断标志物.
