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HepG -2细胞文献资料
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HBV阳性血清体外感染HepG -2细胞方法建立
目的 建立乙型肝炎病毒(HHV)阳性血清体外感染人肝癌细胞系HepG -2的方法.方法 低温同步化处理HepG -2细胞后用高浓度HBV阳性血清与含有4％聚乙二醇的无血清伊格尔极限必需培养基(MEM)共孵育HepG -2细胞,设阴性对照组和空白对照组；18 h后加入含10％胎牛血清的MEM继续培养6d,每隔24h收集细胞和培养上清,荧光定量PCR检测HBV DNA,间接免疫荧光技术检测细胞内乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg).结果 HBV阳性血清感染组HepG -2细胞内和培养上清中在感染后第1d可检测到HBV DNA,分别为(16.04 ±7.99)×103、(8.84±3.97)×103 copies/mL,细胞内DNA含量在第2d达到(3.51±1.86) ×105 copies/mL,然后逐渐下降,在第4d降到检测下限以下,而培养上清中病毒DNA在检测的时间内逐渐升高,在第6天达到(8.41±5.34)×105 copies/mL；间接免疫荧光检测感染组细胞膜和胞浆中均有HBsAg表达；传代培养感染细胞后,在第1代细胞培养上清和细胞内均可检测到HBV DNA(3.58×105、7.34×105 copies/mL),第2代培养上清中可检测到少量HBV DNA(2.89×103 copies/mL),但细胞内检测到HBV DNA低于检测下限(896 copies/mL),第3代细胞的上清和细胞内均未检测到HBV DNA.结论 HBV阳性血清在一定条件下可以感染HepG -2细胞,病毒能在细胞内进行短期复制.
