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奥沙利铂对人结肠癌细胞NF-κB、STAT3表达影响
目的 探讨奥沙利铂对人结肠癌细胞(SW620)核转录因子κB(NF-κB)、信号传导与转录激活因子3(STAT3)表达影响.方法 体外培养SW620细胞至对数生长期后,设不同浓度奥沙利铂(40、80、160 μg/mL)干预组,同时设对照组,72 h后,应用四甲基偶氮唑盐法检测奥沙利铂对SW620细胞的增殖抑制率;应用Hoechst33258细胞核染色法观察细胞形态改变;同时应用蛋白印迹法(Western blot)检测细胞内源性NF-κB、STAT3蛋白表达.结果 与对照组比较,奥沙利铂低、中、高剂量组SW620细胞增殖抑制率[分别为(66.19 ±5.93)％、(86.92±7.85)％、(96.85±8.86)％]升高(P＜0.05),细胞凋亡数[分别为(9.46±1.05),(18.57±2.16),(27.29±3.48)个/视野]上升(P＜0.01);与对照组比较,奥沙利铂低、中、高剂量组SW620细胞内源性NF-κB及STAT3蛋白表达量[分别为(0.674 ±0.016)、(0.435 ±0.012)、(0.212±0.009)和(0.485 ±0.015)、(0.264±0.008)、(0.113±0.004)]明显下降(P＜0.01).结论 奥沙利铂能够抑制SW620细胞增殖,其机制可能与抑制SW620细胞内源性NF-κB、STAT3表达有关.
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基于荧光共振能量转移技术的STAT3二聚化抑制剂筛选模型的建立
目的 构建信号传导与转录激活因子3 (signal transducer and activator of transcription factor 3,STAT3)二聚化抑制剂筛选模型,为STAT3抑制剂筛选提供实验方法.方法 分别构建pECFP-N1-STAT3和pEYFP-N1-STAT3的荧光报告栽体,利用脂质体转染技术将二者共转入HEK-293T细胞,利用ECFP和EYFP2种荧光蛋白之间能量共振转移,检测磷酸化STAT3分子的二聚化水平,并检测Stattic对二聚化的影响.结果 成功构建了pECFP-N1-STAT3和pEYFP-N1-STAT3的荧光报告载体.将2种荧光报告载体共转染HEK-293T细胞后,Western Blot检测结果显示STAT3以及p-STAT3的表达水平明显增加.以458 nm波长激发ECFP,其发射波长可激发EYFP.加入STAT3二聚化抑制剂Stattic后,荧光强度降低,且呈现一定的剂量依赖性.结论 基于荧光共振能量转移技术的STAT3二聚化抑制剂筛选模型构建成功.
