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杂色曲霉素对人外周血单个核细胞表面HLA-Ⅰ分子表达的影响
目的探讨杂色曲霉素(ST)对体外培养的人外周血单个核细胞表面(HPBMc)HLA-Ⅰ分子表达的影响.方法采用流式细胞定量术(FCM)和免疫印迹(Western blot)分析方法,研究不同浓度ST(0.125、0.25、0.5、1和2 mg/L)处理后人外周血单个核细胞表面HLA-Ⅰ分子表达的变化.结果FCM定量分析结果表明,经不同浓度ST处理24小时后,与对照组相比,各组细胞HLA-Ⅰ的平均荧光强度均降低,以较高浓度(0.5、1和2mg/L)ST处理组降低更明显(P＜0.05).在0.125mg/L到2mg/L的浓度范围内,随ST处理浓度的升高,HLA-Ⅰ荧光指数逐渐降低,两者呈明显的负相关(r=-0.841,P＜0.01).免疫印迹结果也表明,随ST浓度的增高,HLA-Ⅰ分子降低越明显.结论提示在0.125mg/L到2mg/L的浓度范围内,ST抑制人外周血单个核细胞表面HLA-Ⅰ分子的表达呈现出负的剂量-反应关系.
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HBV野生株及C区突变株调节HLA-Ⅰ表达的作用
目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)及其C区突变对机体人类白细胞抗原-Ⅰ(HLA-Ⅰ)表达的影响和机制.方法 构建HBV C区突变株G87、V60的真核表达载体,转染HepG2细胞,检测转染细胞中HLA-Ⅰ的表达以及抗原提呈相关基因LMP2、TAP1和tapasin的mRNA表达.结果 各转染细胞株均能有效表达HBsAg;各转染细胞株均有HLA-Ⅰ表达,野生株略高于C区突变株G87、V60;TAP1 mRNA表达上调,LMP和tapasin mRNA均未见明显表达.结论 HBV能诱导HepG2细胞内HLA-Ⅰ分子的合成,使TAP1基因转录增强,HLA-Ⅰ的表达上调.相对于HBV野生株而言,C区突变株G87、V60使宿主细胞内HLA-Ⅰ mRNA及其蛋白的表达水平降低.
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人胶质瘤细胞U251逃逸NK细胞免疫杀伤机制的初步探讨
目的 探讨人神经胶质瘤细胞U251逃逸同种异体NK细胞免疫杀伤的机制.方法 以K562细胞为对照,应用LDH释放法检测不同效靶比时NK细胞体外杀伤U251细胞的活性.用RT-PCR检测K562和U251细胞MHC-I类链相关分子A和B(MICA/B)、人巨细胞病毒糖蛋白UL16结合蛋白(ULBP1～3)基因,用流式细胞仪检测两细胞MICA/B、ULBP1～3和HLA-Ⅰ分子的表达情况.效靶比20:1时用单抗分别阻断K562和U251细胞表面MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3和HLA-Ⅰ类分子,观察NK细胞对其杀伤活性的变化.结果 同一效靶比时NK细胞杀伤U251细胞的活性明显低于杀伤K562细胞的活性,两者之间差异有统计学意义(P＜0.05);K562和U251细胞均表达基因MICA/B和ULBP1～3,但U251细胞仅低表达ULBP2分子.用单抗封闭MICA/B和ULBP1～3分子后,NK细胞对K562细胞的杀伤活性明显降低,对U251细胞的杀伤活性无明显改变.封闭HLA-Ⅰ类分子后NK细胞对U251细胞的杀伤活性明显上升,对K562细胞的杀伤活性无明显改变.结论 U251细胞逃逸NK细胞免疫杀伤机制可能是由于U251细胞高表达HLA-Ⅰ类分子,不表达NKG2D的配体MICA/B和ULBP1～3.
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乙型肝炎病毒前C区变异对HepG2细胞HLA-Ⅰ表达的影响
目的研究乙型肝炎病毒(HBV)前C区热点变异对宿主细胞HLA-Ⅰ分子表达的影响. 方法构建HBV前C区野毒株及A83、A83/A86变异株真核表达质粒,转染HepG2细胞,鉴定目的基因在宿主细胞中的生物活性,流式细胞术检测HLA-Ⅰ分子的表达. 结果 PCR和ELISA法分析能检测到目的DNA片段和HBeAg,转染细胞表达HLA-Ⅰ分子的平均荧光强度不同,野毒株为1.3,前C区变异后平均荧光强度增加,尤以A83变异表达增强显著(17.6),A83/A86为7.3. 结论前C区热点变异后宿主细胞HLA-Ⅰ分子的表达为上调.
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伏马菌素B1对人外周血单个核细胞表面HLA-Ⅰ分子表达的影响
目的:探讨伏马菌素B1(FB1)对体外培养的人外周血单个核细胞表面(HPBMc) HLA-Ⅰ分子表达的影响.方法:采用流式细胞术(FCM)、Western blot及半定量RT-PCR方法,研究不同浓度FB1(10和50 μmol/L)处理后人外周血单个核细胞表面HLA-Ⅰ分子表达的变化.结果:FCM定量分析结果表明,经FB1处理24 h后,两组FB1处理细胞HLA-Ⅰ的平均荧光强度均较对照组降低(P＜0.05),但是在两个处理组之间无统计学意义.Western blot也证实了上述结果.在mRNA水平上,分别检测了HLA-Ⅰ分子3个等位基因HLA-A,HLA-B,HLA-C的表达情况.结果显示,FB1处理后,HLA-A、HLA-B mRNA的表达均没有明显影响,仅HLA-C mRNA的表达较对照组降低.结论:10和50 μmol/L FB1处理24 h可抑制人外周血单个核细胞表面HLA-Ⅰ分子的表达.
