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雄黄微生物提取液诱导K562/ADM细胞凋亡的作用机制研究
目的:观察雄黄微生物提取液对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用,探讨其作用机制、并初步探寻雄黄溶解后表现药理活性的化学物种.方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法、AnnexinV-PI双染法染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(FCM)观察K562/ADM细胞凋亡,FCM测定K562/ADM细胞Fas、Bcl-2、Caspase3的活性变化,并以H3AsO3(As2O3在该溶液中的主要存在形式)作为阳性对照.结果:雄黄微生物提取液可抑制K562/ADM细胞增殖;K562/ADM呈典型凋亡形态改变;DNA电泳可见梯状条带出现;FCM分析显示:G1期细胞比例增高,G2-M和S期阻滞;Fas蛋白表达明显上调、Bcl-2蛋白表达显著下调、Caspase-3活性明显增强.结论:雄黄微生物提取液可通过Fas/Bcl-2途径,激活Caspase-3而诱导K562/ADM细胞凋亡.砷酸(V)、甲基砷酸盐(V)可能是雄黄溶解后表现药理活性的主要化学物种.
关键词: K562/ADM细胞 雄黄微生物提取液 凋亡 活性成分 -
雄黄微生物提取液对K562/ADM细胞P-糖蛋白和多药耐药基因表达的影响
目的:研究雄黄微生物提取液(RBS)诱导K562/ADM细胞凋亡的作用,并探讨其对P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药基因(MDRI)表达的影响.方法:采用"微生物浸出"法制备RBS,并以H_3AsO_3作为阳性对照,AnnexinV-PI双染法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞P-gp表达率;逆转录聚合酶链技术(RT-PCR)检测细胞MDRI mRNA表达水平.结果:RBS可诱导多药耐药白血病细胞发生典型凋亡,抑制P-gp的表达,下调MDRImRNA表达水平.在含砷量相同的条件下,RBS诱导效应明显强于H_3AsO_3.结论:诱导细胞凋亡、下调P-gp/MDRI蛋白的表达,可能是雄黄逆转白血病耐药的重要分子机制.