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姜黄素对结肠癌细胞SW620的体外抑制作用及作用靶点的虚拟筛选
目的:探讨姜黄素对结肠癌SW620细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡的作用及虚拟筛选相关作用靶点.方法:以不同浓度的姜黄素作用于体外培养的结肠癌SW620细胞,通过MTT法检测姜黄素对细胞生长的抑制作用,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,透射电镜观察细胞凋亡时的超微形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况；计算机辅助设计对作用靶点进行虚拟筛选.结果:MTr实验显示姜黄素可抑制SW620细胞的生长,显微镜下可观察到细胞肿胀、破裂、呈坏死状,透射电镜下观察发现细胞体积缩小,细胞核固缩,核内染色质凝集,内质网扩张,空泡形成增多,出现明显的凋亡现象.流式细胞仪可检测到细胞凋亡率增加,呈时间及浓度依赖性:虚拟筛选出19个可能的作用靶点.结论:姜黄素通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制SW620细胞的生长.
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TF/Ⅶa活化PAR2后经钙信号促进SW620细胞的增殖和迁移
目的 探讨钙信号参与凝血因子Ⅶa依赖组织因子(TF)激活蛋白酶活化受体2(PAR2),从而促进结肠癌SW620细胞增殖、迁移的可能机制.方法 Ⅶa(10 nmol/L)及PAR2激动剂(PAR2-AP,100 μmol/L)作用负载fluo-4/AM的SW620细胞,激光共聚焦显微镜测定细胞内钙离子荧光强度的变化；钙抑制剂EGTA(1 mmol/L)和毒胡萝卜内酯(thapsigargin,TG,lμmol/L)预处理细胞后,Ⅶa(10 nmol/L)、PAR2-AP(100 μmol/L)再分别处理细胞,western blot检测p-ERK1/2、t-ERK1/2蛋白的表达；MTT法及流式细胞术检测SW620细胞的增殖情况、transwell法检测细胞迁移的变化.结果 Ⅶa(10 nmol/L)和PAR2-AP(100 μmol/L)处理SW620细胞后,胞内钙离子荧光强度瞬时升高后降低,分别在60、30 s达到峰值；EGTA和TG预处理细胞,能明显降低Ⅶa、PAR2-AP对p-ERK1/2蛋白的活化作用(P＜0.05),抑制其对细胞增殖和迁移的促进作用.结论 TF/Ⅶa激活PAR2后,经钙信号通路活化下游ERK1/2信号,促进SW620细胞的增殖和迁移.
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携带Lipocalin2基因的腺病毒对结肠癌细胞SW620的体外抑制作用
目的 探讨携带Lipocalin2基因的腺病毒对结肠癌SW620细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡的作用.方法 以不同浓度梯度的腺病毒作用于体外培养的结肠癌SW620细胞,通过MTT法检测腺病毒对细胞生长的抑制作用,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,透射电镜观察细胞凋亡时的超微形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 MTT实验显示携带Lipocalin2基因的腺病毒可抑制SW620细胞的生长,显微镜下可观察到细胞肿胀、破裂、呈坏死状,透射电镜下观察发现细胞体积缩小,细胞核固缩,核内染色质凝集,并附于一侧核膜的边缘,内质网扩张,空泡形成增多,出现明显的凋亡现象.流式细胞仪可检测到SW620细胞凋亡率明显增加,呈时间及浓度依赖性.结论 携带Lipocalin2基因的腺病毒能通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制SW620细胞的生长.
关键词： 腺病毒 结肠癌细胞SW620 流式细胞仪 细胞凋亡 透射电镜
