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核因子κB在凝血因子Ⅶa促进结肠癌SW620细胞增殖迁移中的作用
目的 探讨核因子κB(NF-κB)在促进结肠癌SW620细胞增殖迁移过程中的作用及其可能的机制。方法 以凝血因子Ⅶa、NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)等处理结肠癌细胞株SW620，采用Western blot法检测细胞核NF-κB(p65)、细胞浆NF-κB抑制蛋白（IκB-o）和凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶7（caspase-7）的蛋白表达变化；采用流式细胞术检测SW620细胞的细胞周期变化；采用Transwell法测定SW620细胞的迁移能力；采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测白细胞介素8( IL-8)和组织因子(TF) mRNA的表达水平。结果凝血因子Ⅶa能够显著下调细胞浆中IκB-o的表达水平，并使细胞核内NF-κB的表达水平升高，单克隆抗TF和抗蛋白酶激活受体2(PAR2)抗体能够抑制凝血因子Ⅶa的这一作用。PDTC能够明显干预凝血因子Ⅶa对SW620细胞增殖、迁移的促进作用。PDTC能够明显干预凝血因子Ⅶa对SW620细胞中TF、IL-8 mRNA表达的促进作用和对caspase-7蛋白表达的下调作用。结论 凝血因子Ⅶa与细胞表面TF结合形成TF/Ⅶa复合物，活化受体PAR2，经NF-κB通路上调IL-8、下调caspase-7的表达，促进SW620细胞的增殖与迁移。TF/Ⅶa/PAR2/NF-κB通路还可进一步上调TF的表达，从而形成TF/Ⅶa/PAR2/NF-κB/TF正反馈通路。
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PKCα参与凝血因子Ⅶa/TF激活PAR2促进SW620细胞迁移
目的 探讨蛋白激酶C α(PKC α)参与凝血因子Ⅶa依赖组织因子(TF)激活蛋白酶激活受体2 (PAR2),从而促进SW620细胞迁移以及可能的作用机制.方法 用蛋白酶激活受体2激动剂(PAR2-AP)、Ⅶa、PKC激动剂佛波醇酯(PMA)等刺激物处理SW620细胞,并用抑制抗体(抗TF、抗PAR2)、同型对照抗体(mopc-21)进行抑制试验.用western blot检测其PKCα与p-PKCα的表达,免疫荧光试验观察PKCα的分布情况；分别用PMA(100nmol/L)、Ⅶa(10 nmol/L)及PKCα抑制剂(safingol,10 μmol/L)处理SW620细胞,Transwell试验观察细胞迁移情况,定量PCR法检测其MMP-9 mRNA表达水平.结果 PMA(100 nmol/L),因子Ⅶa(10 nmol/L)及PAR2-AP(100 μmol/L)能明显促进PKCα的磷酸化(F=289.9,P＜O.05),而对PKCα的表达没有显著性影响(F=2.02,P＞0.05)；免疫荧光实验结果表明,PKCα自胞浆向核膜与核内发生转位；加入抗TF及抗PAR2抗体能够显著抑制因子Ⅶa对PKCα的激活,而同型对照抗体(mopc-21)没有此作用；Transwell试验与定量PCR结果表明,PKCα抑制剂明显阻断因子Ⅶa对细胞迁移及MMP-9表达的促进作用.结论 因子Ⅶa依赖TF活化PAR2,经信号分子PKCα介导,上调SW620细胞MMP-9表达,促进细胞的迁移.
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TF/Ⅶa活化PAR2后经钙信号促进SW620细胞的增殖和迁移
目的 探讨钙信号参与凝血因子Ⅶa依赖组织因子(TF)激活蛋白酶活化受体2(PAR2),从而促进结肠癌SW620细胞增殖、迁移的可能机制.方法 Ⅶa(10 nmol/L)及PAR2激动剂(PAR2-AP,100 μmol/L)作用负载fluo-4/AM的SW620细胞,激光共聚焦显微镜测定细胞内钙离子荧光强度的变化；钙抑制剂EGTA(1 mmol/L)和毒胡萝卜内酯(thapsigargin,TG,lμmol/L)预处理细胞后,Ⅶa(10 nmol/L)、PAR2-AP(100 μmol/L)再分别处理细胞,western blot检测p-ERK1/2、t-ERK1/2蛋白的表达；MTT法及流式细胞术检测SW620细胞的增殖情况、transwell法检测细胞迁移的变化.结果 Ⅶa(10 nmol/L)和PAR2-AP(100 μmol/L)处理SW620细胞后,胞内钙离子荧光强度瞬时升高后降低,分别在60、30 s达到峰值；EGTA和TG预处理细胞,能明显降低Ⅶa、PAR2-AP对p-ERK1/2蛋白的活化作用(P＜0.05),抑制其对细胞增殖和迁移的促进作用.结论 TF/Ⅶa激活PAR2后,经钙信号通路活化下游ERK1/2信号,促进SW620细胞的增殖和迁移.
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c-Jun/AP-1在因子Ⅶa促进SW620细胞增殖和迁移中的激活及其调控作用
目的 探讨c-Jun/激活蛋白1(AP1)在活化的凝血因子Ⅶa促进SW620细胞增殖、迁移过程中的作用及其调控机制.方法 Western blot检测人结肠癌SW620细胞中Ⅶa、组织因子(TF)、蛋白酶激活受体2 (PAR2)、细胞外调节蛋白激酶1/2 (ERK1/2)抑制剂U0126、p38抑制剂SB203580处理后cJun、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)的蛋白水平变化；MTT和Transwell法分别检测AP-1 抑制剂姜黄素对细胞增殖和细胞迁移能力的影响.结果 单克隆抗TF和PAR2抗体、U0126均能抑制Ⅶa促进SW620细胞中c-Jun/AP-1活化的过程(P＜0.05).姜黄素降低Ⅶa诱导的SW620细胞增殖和细胞迁移能力(P＜0.05).结论 TF/Ⅶa复合物通过激活PAR2促进SW620细胞增殖和迁移,c-Jun/AP-1在此过程中被激活并发挥重要作用,ERK1/2为c-Jun/AP-1上游分子具有调控效应.
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EGCG对TF/Ⅶa/PAR2促进SW620细胞增殖与迁移的干预作用
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对组织因子(TF)/凝血因子Ⅶa/蛋白酶激活受体(PAR)2促进结肠癌细胞株SW620细胞增殖与迁移的干预作用.方法 用不同浓度EGCG、蛋白酶激活受体2激动剂(PAR2-AP)、Ⅶa刺激SW620细胞,采用MTT法、transwell法分别检测细胞增殖及迁移能力,实时定量PCR检测细胞TF及半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)7 mRNA表达,发色底物法与Western blot分别检测TF活性、Caspase-7蛋白表达.结果 与PAR2-AP或Ⅶa单独处理相比,EGCG+PAR2-AP、EGCG+Ⅶa对SW620细胞增殖、迁移的促进作用明显降低,TFmRNA表达及活性下降,Caspase-7 mRNA及蛋白表达上调(P＜0.05).结论 EGCG可干预SW620细胞TF和Caspase-7的表达,抑制TF/Ⅶa/PAR2对细胞增殖与迁移的促进作用.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 组织因子 凝血因子Ⅶa 蛋白酶激活受体2 -
重组人源性凝血因子Ⅶa治疗产后出血13例疗效分析
目的：探讨重组人源性凝血因子Ⅶa( rFⅦa)对产后出血患者的治疗效果。方法对13例产后出血常规止血治疗效果欠佳的患者,在输血的同时,加以rFⅦa 90μg/kg静脉滴注辅助治疗,视止血效果,多再加rFⅦa两次,每次45μg/kg,若止血效果仍欠佳,行外科手术治疗。结果13例产后出血常规止血治疗效果欠佳的患者,经 rFⅦa 治疗,有8例得到有效控制,有效率达61.54％(8/13),其凝血时间(PT)及凝血活酶时间( APTT)缩短,血红蛋白( Hb)、血小板数量( PLT)及纤维蛋白原( FIB)升高。结论 rFⅦa可有效治疗常规止血治疗无效的产后出血。
