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人乳腺癌ZR-75-1细胞中RNA结合蛋白38对孕激素受体表达的调节作用及其机制
目的明确乳腺癌细胞株ZR?75?1中RNA结合蛋白38（ RNPC1）的表达对孕激素受体（PR）表达的调节作用。方法采用慢病毒转染法过表达RNPC1基因，以实时荧光定量PCR（qRT?PCR）和Western blot法检测RNPC1调节PR表达的情况；以放线菌素实验研究RNPC1调控 PR表达的机制。采用免疫组化法检测80例乳腺癌组织中RNPC1蛋白和PR蛋白的表达。结果免疫组化检测结果显示，在PR蛋白表达阳性的29例乳腺癌组织中，RNPC1蛋白高表达16例；在PR蛋白表达阴性的51例乳腺癌组织中，RNPC1蛋白低表达41例。 qRT?PCR检测结果显示，过表达RNPC1组和过表达对照组乳腺癌ZR?75?1细胞中，PR mRNA的相对表达量分别为1．764±0．028和1．001±0．037，差异有统计学意义（ P＜0．01）；而干扰RNPC1组和干扰对照组乳腺癌ZR?75?1细胞中PR mRNA的相对表达量分别为0．579±0．007和1．000±0．002，差异有统计学意义（P＜0．01）。 Western blot法检测结果显示，在乳腺癌ZR?75?1细胞中，过表达RNPC1可使PR蛋白的表达增加；而敲除RNPC1的表达后， PR蛋白的表达减少。放线菌素实验结果显示，乳腺癌ZR?75?1细胞过表达RNCP1后，PR mRNA的稳定性增加，其半衰期由过表达对照组的4．0 h增加为6．5 h；而敲除RNPC1的表达后，PR mRNA的稳定性降低，其半衰期由干扰对照组的4．1 h降为3．0 h。结论 RNPC1在调节乳腺癌ZR?75?1细胞PR mRNA和蛋白的表达中发挥重要作用。
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抑癌基因PTEN对乳腺癌ZR-75-1细胞增殖和转移的抑制作用
背景与目的:研究表明,抑癌基因PTEN不仅能抑制肿瘤细胞的增殖,还能抑制其转移,但其机理还不甚明了.本文研究抑癌基因PTEN对人乳腺癌ZR-75-1细胞增殖和转移的作用.方法:以脂质体介导法分别将野生型PTEN质粒和磷酸酶缺陷的PTEN质粒转染人乳腺癌ZR-75-1细胞,用MTT法测定细胞增殖抑制率:转染后用嘌呤霉素筛选阳性克隆.用Western blot法检测细胞中PTEN蛋白的表达.通过细胞-基质粘附实验和人工重组基底膜侵袭实验,检测细胞粘附抑制率与侵袭抑制率.结果:野生型PTEN质粒转染的ZR-75-1细胞增殖明显被抑制,并伴有部分细胞凋亡;该细胞与未经转染的和磷酸酶缺陷的PTEN质粒转染的ZR-75-1细胞比较.细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(42.7% vs.0%及2.7%,P＜0.01),细胞增殖抑制效应随细胞培养时间与质粒浓度的增加而增强.而磷酸酶缺陷的PTEN质粒转染的与未经质粒转染的ZR-75-1细胞比较,细胞增殖抑制率差异无统计学意义(2.7%vs.0%,P＞0.05).在两种PTEN质粒转染的ZR-75-1细胞中PTEN蛋白均明显表达,其中转染野生型PTEN质粒的细胞的粘附抑制率与侵袭抑制率分别达65.7%和70.4%,而转染磷酸酶缺陷的PTEN质粒的ZR-75-1细胞的粘附抑制率与侵袭抑制率分别只有8.8%和6.9%(P＜0.05).结论:具有双特异磷酸酶活性的野生型PTEN基因对ZR-75-1细胞的增殖和转移有一定的抑制作用.
