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胃癌组织β-catenin基因突变、蛋白异常表达及PTEN蛋白表达的研究
目的探讨β-catenin基因突变、蛋白异常表达及PTEN蛋白表达与胃癌发生发展的关系.方法采用PCR-SSCP分析法结合免疫组化技术对胃癌组织中β-catenin基因突变、蛋白异常表达及PTEN蛋白表达进行研究.结果胃癌组织中β-catenin突变率为13.5%(7/25),β-catenin蛋白异常表达率为50%(26/52),肠型胃癌异常表达率76.5%,显著高于胃型胃癌39.4%(P＜0.05),β-catenin基因异常与临床病理参数无显著相关.胃癌中PTEN蛋白阳性表达率为53.8%(28/52),显著低于正常组织中表达率(88.5%,46/52)(P＜0.01).高/中分化腺癌PTEN蛋白阳性表达率84.6%(11/13),高于低分化腺癌(45.2%)(P＜0.05),临床Ⅰ-Ⅱ期蛋白表达阳性率(68.7%),高于Ⅲ-Ⅳ期(30.0%)(P＜0.05).结论β-catenin基因可能是肠型胃癌的易感基因,β-catenin异常可能是胃癌的早期变化.PTEN基因异常可能为胃癌晚期变化,可能参与了两型胃癌的发生发展.
关键词： 胃癌 β-catenin基因 PTEN基因 突变 -
胃癌组织中PTEN的表达及意义
目的:探讨抑癌基因PTEN在胃癌组织中的表达水平及与其生物学行为的关系.方法:应用免疫组织化学SP法检测64例胃癌组织、10例正常胃黏膜组织中的PTEN蛋白表达情况.结果:64例胃癌组织中PTEN阳性率51.6%,显著低于正常胃黏膜组织(100%).结论:PTEN基因的异常改变与胃癌的发生发展密切相关,可能是胃癌进一步恶化的标志之一,可作为胃癌生物学行为的参考指标,为胃癌的基因治疗提供参考依据.
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PTEN对髓系白血病细胞VEGF及MMP表达的影响
目的 探讨在慢性髓系白血病中与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)对血管内皮生长因子(VEGF)及金属基质蛋白酶(MMP)相互影响及其作用机制.方法 1)研究10例慢性髓系白血病慢性期CML-CP、10例急变期CML-BC及10例正常人骨髓单个核细胞内PTEN、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平变化.2)将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及对照载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性髓系白血病细胞系K562.MTT检测细胞增殖;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA水平变化,Western blot及明胶酶谱检测PTEN、p-Akt、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果 CML-BC患者中PTEN mRNA表达水平低于CML-CP及正常对照组(P＜0.05),而VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA在CML-BC患者中均高于CML-CP及正常对照组(P＜0.05).以MOI=200转染K562细胞3d后Ad-PTEN-GFP组K562细胞内VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平均明显低于Ad-GPF组和未转染组(P＜0.05),PTEN与VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平呈负相关,转染Ad-PIEN-GFP组与转染Ad-GFP组比较VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平分别降低79.12％,82.99％,82.52％,p-Akt及VEGF、MMP-2、MMPO蛋白表达水平分别降低96.15％,80.88％,65.03％,78.99％.结论 PTEN基因可能通过抑制VEGF、MMP-2、MMP-9表达,抑制髓系白血病细胞血管新生及侵袭.
关键词： PTEN基因 血管内皮细胞生长因子 金属基质蛋白酶 白血病 K562细胞系 -
少突胶质细胞瘤中PTEN基因突变和10q 染色体的杂合性缺失分析
目的探讨PTEN基因突变和10 q染色体的杂合性缺失(LOH)在少突胶质细胞瘤发生和发展中的意义.方法以55例少突胶质细胞瘤和混合性胶质细胞瘤为研究对象,PCR扩增PTEN基因所有9个外显子,其产物经变性梯度凝胶电泳(DGGE)后,DNA序列分析检测PTEN基因突变.应用不同颜色荧光标记10 q微卫星标志物引物,PCR扩增后,其产物在自动测序仪上进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,用Gene Scan软件分析LOH.结果2/55例有PTEN基因突变,1例是PTEN的第9外显子的20号T碱基缺失导致终止密码351易位至347,另1例在139位发生C到A的转换,使得Phe变成Leu.23/55(42%)例出现染色体10 q的LOH,其中15/55例位于10 q23,3(D10S541),其为PTEN基因位点,12/55例10q微卫星标志物位点完全缺失.结论在少突胶质细胞瘤中PTEN突变较少见,而10 q LOH较频繁,尤其在恶性度高的少突胶质细胞瘤中表现明显,提示10 q LOH与少突胶质细胞瘤恶性进展有关,且10 q上可能存在其他抑癌基因.
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脑星形胶质细胞瘤中PTEN基因缺失、突变意义的探讨
目的探讨人脑星形胶质细胞瘤中PTEN基因缺失、突变的意义.方法从32例人脑星形胶质细胞瘤组织中抽提RNA,经RT-PCR同管共扩增PTEN基因和GAPDH基因,计算机凝胶图像分析系统计算PTEN的相对表达量,同时采用PCR-SSCP法检测PTEN基因突变.结果本组星形胶质细胞瘤中PTEN缺失率为12.5%(4/32),均为肿瘤Ⅳ级,占Ⅳ级肿瘤的40%(4/10);PTEN相对表达量Ⅳ级(0.8323)显著低于Ⅱ(4.3533)、Ⅲ级(2.4487)(P＜0.01).PTEN突变率为10.7%(3/28),主要分布在肿瘤Ⅲ级5%(1/20)和Ⅳ级33.3%(2/6)中.PTEN的缺失和突变总检出率为21.9%(7/32),占Ⅳ级星形胶质细胞瘤60%(6/10).结论PTEN基因缺失和突变是星形胶质细胞瘤从低级别向高级别进展的晚期基因事件,特别在Ⅳ级中PTEN缺失与突变是常见的分子现象.
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抑癌基因pten-骨髓瘤治疗新靶点
基因pten是迄今为止发现的第一个具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因,通过负调控多种信号传导途径来调节细胞周期进展、细胞凋亡、肿瘤细胞迁移和侵袭.多发性骨髓瘤(MN)是发生于B细胞分化终末阶段即浆细胞阶段的恶性肿瘤,遗传学改变被认为是MM发病的重要致病因素,抑癌基因的缺失是重要的遗传学变化.然而,目前对于pten在MM中的遗传学改变知之甚少,本文综述了pten在MM领域中的研究进展,包括pten的结构及其作用机制,以及pten与骨髓瘤问题,为治疗MM寻找新的基因靶点提供参考.
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抑癌基因pten在骨髓增生异常综合征及急性髓系白血病的表达
为了研究pten基因在骨髓增生异常综合征(MDS)、急性髓系白血病(AML)患者中的表达及其意义,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹杂交(Western blot)方法检测Jurkat细胞株、35例MDS、45例AML及20例正常人骨髓有核细胞中pten mRNA及其蛋白的表达.结果表明:pten mRNA在阴性对照Jurkat细胞株不表达,MDS组的阳性表达率(77.1%)低于正常对照组(90.0%),但差异无统计学意义(p＞0.05);AML组阳性表达率(60.0%)低于正常对照组,差异有统计学意义(p＜0.05);MDS-RAEB组阳性表达率(70.0%)低于MDS-RCMD组(86.7%),初发/复发AML组阳性表达率(53.3%)低于完全缓解AML组(73.3%),但差异均无统计学意义(p＞0.05).时各组pten mRNA相对表达量分析发现,MDS及AML组均明显低于正常对照组(p＜0.005);MDS-RAEB组低于MDS-RCMD组(p＜0.05);初诊/复发的AML组明显低于完全缓解的AML组(p＜0.001);MDS组与AML组相比,差异无统计学意义(p＞0.05).PTEN蛋白表达阳性率在MDS组(65.7%)及AML组(54.8%)均低于正常对照组(90%)(p＜0.05);MDS-RCMD组(80.0%)与MDS-RAEB组(55.0%)相比,阳性表达率均无统计学意义(p＞0.05),但初诊/复发的AML组(44.4%)与完全缓解的AML组(73.3%)相比,差异有统计学意义(p＜0.05).结论:pten mRNA在MDS、AML中表达完全缺失并不多见,但表达强度较正常人明显减弱.PTEN蛋白在MDS、AML中阳性表达率低于正常人,且与mRNA表达水平不一致.pten基因的表达异常参与了MDS及AML的发病.
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齐墩果酸诱导Jurkat细胞凋亡及对PTEN表达的影响
本研究旨在探讨齐墩果酸诱导人T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡及时PTEN表达的影响.应用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,用Hoechst33258染色观察凋亡细胞形态,Annexin V/PI双染色后流式细胞仪检测细胞凋亡,并应用实时定量RT-PCR和Westem blot方法分别检测PTEN基因及其蛋白表达水平.结果表明:齐墩果酸以时间和剂量依赖方式抑制Jurkat细胞增殖,12、24和48小时的半数抑制浓度(IC(50))分别约为85.35、53.66和33.18μmol/L.流式细胞术检测显示,齐墩果酸以0、40、80和160μmol/L浓度作用细胞24小时凋亡率分别为6.72%、19.8%、28.72%和30.12%(p<0.05).80和160μmol/L齐墩果酸分别处理Jurkat细胞24小时后PTEN-mRNA及蛋白表达上调.结论:PTEN基因和蛋白表达上调可能参与齐墩果酸对Jurkat细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用.
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PTEN及TGF-β1在子宫内膜癌中的表达及意义
目的 探讨PTEN和TGF-β1在不同子宫内膜组织中的表达,分析其在子宫内膜癌发病中的意义.方法 选择怀化市第一人民医院1995～2005年间的子宫内膜标本90例,其中子宫内膜癌47例、子宫内膜增生过长24例、正常子宫内膜19例,采用免疫组织化学SP法测定PTEN及TGF-β1在子宫内膜中的表达,所有数据输入SPSS11.0统计软件,采用x2检验行统计分析.结果 PTEN在正常子宫内膜、子宫内膜增生过长和子宫内膜癌中的表达缺失率分别为10.53%、54.17%和70.21%,子宫内膜癌组及子宫内膜增生过长组显著高于正常子宫内膜组(P＜0.005).TGF-β1蛋白的阳性表达率在前述三组中分别为94.74%、70.83%和68.09%,三组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).PTEN蛋白表达缺失率与细胞分化程度无关(P＞0.05),而TGF-β1蛋白的阳性表达率在高分化组明显高于中低分化组(P＜0.05).PTEN蛋白表达缺失组,TGF-β1阳性率为72.73%;PTEN蛋白表达阳性组,TGF-β1阳性率为57.14%,两组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 抑癌基因PTEN的表达缺失与子宫内膜癌的发病有关;细胞分化程度越高,TGF-β1蛋白阳性表达率越高,与PTEN蛋白表达缺失率无关.
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PTEN在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达及意义
目的：检测肿瘤抑制基因PTEN在鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达及意义。方法采用免疫组化EnVision法检测50例鼻型NK/T细胞淋巴瘤中PTEN的表达，并以30例淋巴结反应性增生组织作为对照组，分析鼻型NK/T细胞淋巴瘤中PTEN的表达与不同临床病理特征之间的关系。结果 PTEN在鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达率为32.0%，显著低于淋巴结反应性增生组织中的表达率86.7%（P＜0.01）。PTEN的表达与患者年龄、性别、发生部位、临床分期、乳酸脱氢酶水平（LDH）均无相关性（P＞0.05），而与Ki-67的表达呈负相关（P＜0.05）。结论 PTEN在鼻型NK/T细胞淋巴瘤组织中低表达，可能与鼻型NK/T细胞淋巴瘤的发生、发展有关。
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胃癌细胞PTEN甲基化与其表达的相关性
目的:探讨胃癌细胞PTEN基因启动子区域甲基化与其mRNA表达的关系.方法:采用甲基化特异性PCR法(MSP)检测四种胃癌细胞系SGC-7901(中度分化)、BGC-823(低度分化细胞)、MGC-803(低度分化细胞)、HGC-27中PTEN基因甲基化状态,RT-PCR检测四种胃癌细胞系PTEN表达水平(未分化).结果:HGC-27、MGC-803、BGC-823细胞系可检测到PTEN基因启动子的甲基化,SGC-7901细胞未检测到甲基化,甲基化水平的顺序依次为:HGC-27高(138.217±7.898,P＜0.01),MGC-803、BGC-823次之(P＞0.05).PTEN mRNA表达水平的依次顺序为:SGC-7901高(0.336±0.079,P＜0.01),BGC-823、MGC-803次之(P＞0.05),HGC-27表达水平低(0.113±0.047,P＜0.05),其表达水平随着其启动子区甲基化水平增高而降低.PTEN mRNA表达及其启动子甲基化水平还与胃癌细胞分化程度相关.结论:胃癌细胞PTEN基因启动子区域出现异常甲基化,可能是导致其mRNA表达异常的主要原因,也可能是导致胃癌发生、发展的重要机制之一.
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PTEN基因联合奥沙利铂对胆管癌细胞生长抑制的研究
目的探讨脂质体介导PTEN基因转染人胆管癌细胞(QBC939),联合化疗药物奥沙利铂(L-OHP),分别进行人胆管癌细胞体外培养和体内接种生长,观察分析该基因对胆管癌细胞生长的抑制情况,探索人类胆管癌的生物治疗的可行性和方法.方法将携带PTEN基因的真核表达载体pBP-PTEN和不含该基因的空载体.转胆管癌QBC939细胞,嘌呤霉素抗性筛选克隆、扩增培养.绘制细胞生长曲线及MTT细胞活性观察;利用免疫组化检测转染前后PTEN阳性表达率;透射电镜扫描观察转染前后及联合奥沙利铂后细胞的超微结构变化;流式细胞分析细胞的周期变化和细胞凋亡情况;体外细胞侵袭力抑制试验;裸鼠体内肿瘤生长,病理学及电镜扫描的观测.结果PTEN基因转染后QBC939细胞稳定表达,阳性表达率升高(P＜0.05);肿瘤细胞活性下降(P＜0.05),细胞周期G1～S期抑制,细胞凋亡率增加(P＜0.01);透射电镜细胞较成熟、分化好;细胞侵袭力明显抑制(P＜0.05);裸鼠体内肿瘤未转染组生长早,加入奥沙利铂后生长受抑制(P＜0.05),病理证实为腺癌.结论1.脂质体成功将PTEN基因转染人胆管癌QBC939细胞,并稳定表达.2.PTEN基因转染后细胞生长速度无明显变化;MTT实验活性细胞数有所下降.3.转PTEN基因后的胆管癌细胞超微结构变化显示线粒体增多,细胞较成熟、分化好;流式细胞议分析,细胞周期G1期被抑制,细胞凋亡多,侵袭力受到抑制;4.接种转PTEN基因裸鼠的体内成瘤显著抑制;6.转基因的生物治疗联合奥沙利铂(L-OHP)对人胆管癌细胞生长具有显著的抑制作用.
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去脾大鼠对肝纤维化组织中PTEN基因表达的影响
目的 研究去脾脏功能对大鼠肝纤维化组织中PTEN基因表达的影响.方法 胆总管结扎及脾脏切除建立去脾脏功能肝纤维化模型.HE染色及天狼星红染色显示肝纤维化程度;蛋白印迹、实时定量PCR及SP法测定大鼠肝组织中PTEN、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达并检验其相关性.结果 PTEN mRNA表达及PTEN蛋白表达量脾脏切除组高于脾脏假手术组(P＜0.05);α-SMA的蛋白表达量脾脏切除组低于脾脏假手术组(P＜0.05);PTEN蛋白表达量与α-SMA的蛋白表达量呈显著负相关(r=-0.86,P＜0.05).结论 肝纤维化大鼠模型中,去脾脏功能可上调PTEN在肝纤维化组织中的表达,并减少α-SMA的分泌从而延缓肝硬化的发生.
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PTEN基因表达下调对乳腺癌细胞生物学性状的影响
目的 探讨PTEN基因在乳腺癌细胞中的表达及对细胞生物学行为的影响.方法 选择PTEN正常表达的细胞株MDA-MB-231(M231),使用ShRNA方法沉默PTEN的表达,构建PTEN低表达的M231细胞株(M231-3001)及对照组细胞(M231-scr),用RT-PCR、Western-blot方法分析目的基因的表达抑制,通过CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验等方法检测PTEN基因沉默后乳腺癌细胞株M231增殖、迁移及侵袭能力的改变.结果 与对照组M231-scr相比,M231-3001细胞株的PTENmRNA和蛋白的表达明显降低(P＜0.01),M231-3001细胞株相对于M231-scr细胞株增生、繁殖力增强,同时迁移和侵袭能力增加(均P ＜0.05).结论 PTEN基因具有抑癌作用,其表达降低可促进癌细胞增生、迁移和侵袭.
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稳定表达PTEN抑癌基因的炎性乳腺癌细胞系MDA-MB-468的建立和鉴定
目的建立稳定表达外源性PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted fromchromosome ten)基因的人炎性乳腺癌MDA-MB-468细胞系.方法用脂质体lipofectamine 2000转染法,将野生型PTEN基因导入高转移性炎性乳腺癌细胞系MDA-MB-468,经G418筛选抗性克隆,扩大培养后,应用RT-PCR、免疫组化方法及Western blot分析目的基因及其蛋白表达.结果野生型PTEN基因成功地导入炎性乳腺癌细胞系MDA-MB-468,转染细胞稳定表达PTEN蛋白,PTEN蛋白分布于细胞质.结论MDA-MB-468炎性乳腺癌细胞株能稳定表达外源性PTEN基因.
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金雀黄素诱导人子宫内膜癌细胞HEC-1B凋亡及机制的研究
目的 研究金雀黄素(Genistein,GEN)诱导人子宫内膜癌细胞株HEC-1B凋亡,探讨金雀黄素诱导HEC-1B细胞凋亡与抑癌基因PTEN之间的关系.方法 应用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用流式细胞仪检测抑癌基因PTEN蛋白的表达,两者之间的相关性.结果 金雀黄素诱导HEC-1B细胞的凋亡,其作用随剂量增加而增强;金雀黄素可上调HEC-1B细胞抑癌基因PTEN蛋白的表达,其作用随剂量增加而增强.结论 金雀黄素能够诱导HEC-1B细胞凋亡,其机制可能是通过上调HEC-1B细胞PTEN的表达而实现.
关键词： 金雀黄素 子宫内膜癌HEC-1B细胞 细胞凋亡 PTEN基因 -
PTEN基因敲减后HEC-1A细胞生长和信号通路变化的研究
目的 构建人PTEN基因RNAi慢病毒载体,观察PTEN基因敲减前后人子宫内膜癌HEC-1A细胞生长和信号通路的变化,为进一步研究子宫内膜癌的发病机制提供基础.方法 利用慢病毒载体系统,构建人PTEN基因RNAi慢病毒载体,转染HEC-1A细胞,建立PTEN基因敲减细胞模型HEC-1A-ND;Western Blot方法检测PTEN基因敲减前后PTEN蛋白的表达和AKT通路的活化情况,MTT法检测PTEN敲减前后细胞增殖的变化,流式细胞术检测PTEN敲减前后细胞周期的变化.结果 慢病毒介导的RNAi能有效下调PTEN基因的表达,PTEN基因表达下调后,HEC-1A细胞生长受到促进,S期细胞增多,G0-G1期细胞和G2/M期细胞减少,P13K/AKT通路激活.结论 成功构建人PTEN基因RNAi慢病毒载体.PTEN基因敲减后,可以通过激活PI3K/AKT通路,促进细胞生长.
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磷酸酯酶和张力蛋白同源物基因的生物学特性及其在中枢神经系统中的作用
在10号染色体上缺失的磷酸酯酶和张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homolog,PTEN)是1997年克隆出的一个新基因,在多种人类肿瘤中都发现存在PTEN基因的突变或表达水平的异常,因此PTEN被认为是重要的肿瘤抑制基因.此外,PTEN的连锁突变可引起Cowden综合征、Bannayan-Zonana综合征及Lhermitte-Duclos病,这些疾病均有累及神经系统的表型,提示PTEN在神经系统中可能有着重要的作用.现就PTEN基因的生物学特性及其在中枢神经系统中的作用进行综述.
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FTEN在肝癌中表达缺失的意义及其体外转染对人肝癌细胞系的作用
目的探讨PTEN表达与肝细胞癌发生、发展的关系,观察体外转染外源性PTEN对肝癌细胞的生长、细胞周期和超微结构的影响.方法检测PTEN在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达缺失情况,以观察该基因与肝癌病理分级、转移和预后的关系.将含PTEN的反转录病毒载体及空载体转入人肝癌细胞系HHCC,观察转染前后细胞的生长、超微结构、细胞周期及裸鼠致瘤能力改变情况.结果肝癌中PTEN表达缺失率为30.16%(19/63),显著高于正常肝组织0(0/8)和肝硬化组织7.15%(1/14).随着恶性程度的增高,PTEN表达缺失率随之增加.PTEN表达缺失与转移及预后显著相关.PTEN在人肝癌细胞系hHCC中也不表达.将抑癌基因PTEN转入后,hH-CC细胞生长明显受到抑制,细胞超微结构失去部分恶性表型特征,细胞周期由G1→S0期受抑制,并出现凋亡峰,体外成瘤能力下降.结论抑癌基因PTEN失表达多见于肝细胞肝癌进展期,并与肝细胞肝癌分化程度、是否转移以及临床预后相关;体外PTEN的转入可以明显地抑制HHCC生长、体外成瘤能力.
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PTEN与VEGF165 基因mRNA在卵巢癌中表达及相关性研究
目的:探讨PTEN和VEGF165 基因mRNA表达在卵巢癌发生和演进中的作用.方法:利用RT-PCR方法检测正常卵巢(n=5)、卵巢囊肿(n=5)、卵巢交界性肿瘤(n=9)、上皮性卵巢癌(n=60)和卵巢癌细胞系CAOV-3中PTEN和VEGF 165 基因mRNA表达.结果:PTEN基因mRNA在卵巢交界性肿瘤和卵巢癌中的表达水平低于正常卵巢和卵巢囊肿,P<0.05,与卵巢癌的临床病理分期呈负相关,P<0. 05,而与组织分化程度呈正相关,P<0.05.在卵巢内膜样癌中PTEN基因mRNA表达水平显著低于浆液性或黏液性卵巢囊腺癌,P<0.05.VEGF165 基因mRNA在卵巢癌中的表达水平高于正常卵巢和卵巢囊肿,P<0.05,与卵巢癌的临床病理分期呈正相关,P<0. 05,而与组织分化程度呈负相关,P<0.05;浆液性卵巢癌中VEGF165 基因mRNA 表达水平显著高于其他上皮性卵巢癌,P<0.05.VEGF165 基因mRNA随PTEN基因mRNA表达的降低而升高,r=0.728,P<0.05.结论:在卵巢癌中PTEN基因mRNA表达下调和VEGF165 基因mRNA表达上调,2个指标分别与卵巢内膜样癌和浆液性囊腺癌的发生和病理生物学行为关系密切;PTEN基因mRNA表达降低原因可能为通过上调VEGF基因mRNA表达促进新生血管形成,进而参与卵巢癌的发生和演进.
