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金属基质蛋白酶MMP3和MMP7在小鼠药理性孕酮撤退月经模型中的定位
目的 本研究旨在研究金属基质蛋白酶(MMPs)在小鼠药理性孕酮撤退月经模型中的定位. 方法 卵巢切除的小鼠在诱导蜕膜化之后给予米非司酮处理,免疫组化检测金属基质蛋白酶MMP3和MMP7定位. 结果 MMP3从米非司酮处理后0h到24 h,存在于腔上皮下的局部基质、上皮、蜕膜化区域以及基底层和功能层的交界处；从32 h到48 h存在于腔上皮以及其下基质区域.MMP7从0h到24 h存在于基底层,上皮和中间蜕膜化区域,从32 h到48 h与MMP3的定位相一致. 结论 MMP3和MMP7蛋白质在此模型中定位呈区域性分布.
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丹参片治疗口腔黏膜白斑及对局部组织金属基质 蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9表达的影响
目的:探讨丹参片治疗口腔黏膜白斑(OLK)的临床疗效及对局部组织细胞金属基质蛋白酶-2、9(MMP-2、MMP-9)表达的影响.方法:选取2014年5月至2016年3月南京中医药大学附属南京市中西医结合医院OLK患者136例,随机分为对照组与观察组,每组68例,同期进行口腔检查的20例健康人群作为健康对照组.对照组患者给予维甲酸和西瓜霜喷雾剂治疗,观察组则在对照组的基础上联合丹参片治疗.2个月为1个疗程,2组均连续治疗1个疗程,治疗后随访12个月.比较2组治疗后临床疗效,采用免疫组化法检测OLK患者及健康对照组局部黏膜组织中MMP-2、MMP-9表达情况.结果:治疗2个月后观察组总有效率为80.88％,显著高于对照组的63.24％(P<0.05);治疗4个月后观察组总有效率较治疗2个月后明显升高,且高于对照组(P<0.05).与健康对照组比较,观察组局部黏膜组织中MMP-2和MMP-9阳性表达率明显升高(P<0.05);与治疗前比较,治疗2个月及4个月后观察组局部黏膜组织中MMP-2和MMP-9阳性表达率明显降低(P<0.05),且治疗4个月后观察组局部黏膜组织中MMP-2阳性表达率低于对照组(P<0.05);对照组仅治疗4个月后局部黏膜组织中MMP-2阳性表达率较治疗前降低(P<0.05).2组随访期间观察组复发率明显低于对照组(P<0.05),2组癌变率差异无统计学意义(P>0.05).结论:丹参片联合常规药物治疗OLK效果显著,可显著抑制局部组织MMP-2和MMP-9表达,并在短期内对抑制组织癌变具有一定的积极作用.
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活血方对月经出血模型小鼠子宫内膜NF-κB通路与金属基质蛋白酶的影响
目的 探讨活血方对子宫内膜崩解的影响及可能作用机制.方法 将130只C57BL/6J雌性小鼠随机分为假手术组10只、模型组60只、中药组60只.模型组与中药组均采用激素序贯处理复制小鼠月经出血模型,并对左侧宫腔诱导蜕膜化.从造模第9天中药组灌胃活血方20g/(kg·d),假手术组与模型组给予等量的生理盐水.在孕酮撤退后0、8、12、16、24、32h分别于两组中选取一定只数小鼠进行阴道涂片检测,观察小鼠子宫内膜崩解脱落情况,HE染色观察双侧子宫角的病理变化并计算子宫系数,免疫组织化学法检测子宫组织MMP3、MMP9、P50、P65表达,Real-time PCR检测左侧子宫组织MMP3 mRNA、MMP9 mRNA的表达,Western blot方法检测左侧子宫组织MMP3、MMP9蛋白表达与P50、P65核蛋白表达.结果 与假手术组比较,模型组小鼠子宫左侧有明显病理改变,从12h出血小鼠比率增加,左侧子宫系数明显增加(P＜0.05);与模型组比较,中药组的出血时程明显缩短,在0、8、12h左侧子宫系数增加、32h降低(P＜0.05).与模型组比较,中药组左侧子宫组织MMP3 mRNA、MMP9 mRNA 0～32 h表达均明显上调(P＜0.05);MMP3及MMP9蛋白在0～12h显著升高,32h显著下调(P＜0.05);与模型组比较,中药组小鼠左侧子宫组织P50核蛋白在0、12h显著上调,在8、16、24、32h显著下调(P＜0.05);P65核蛋白在0、12、24h显著上调,在32 h显著下调(P＜0.05或P＜0.01). 结论 活血方可缩短子宫内膜崩解时程,其机制可能与调节崩解相关因子MMP3、MMP9的表达及NF-κB信号通路的快速激活与及时关闭相关.
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不稳定心绞痛患者血浆基质金属蛋白酶8水平探讨
间质胶原,尤其是I型胶原,是动脉粥样硬化(AS)斑块的主要组分.金属基质蛋白酶(MMPs)在胶原降解中起着重要作用,可导致斑块不稳定和破裂,从而发生急性心肌梗死和不稳定心绞痛(UAP)等事件.有UAP患者血浆MMP-2和MMP-9水平高于稳定性心绞痛(SAP)或对照组,提示MMP-2和MMP-9可能成为UAP的生物标志物[1].
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PTEN对髓系白血病细胞VEGF及MMP表达的影响
目的 探讨在慢性髓系白血病中与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)对血管内皮生长因子(VEGF)及金属基质蛋白酶(MMP)相互影响及其作用机制.方法 1)研究10例慢性髓系白血病慢性期CML-CP、10例急变期CML-BC及10例正常人骨髓单个核细胞内PTEN、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平变化.2)将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及对照载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性髓系白血病细胞系K562.MTT检测细胞增殖;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA水平变化,Western blot及明胶酶谱检测PTEN、p-Akt、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果 CML-BC患者中PTEN mRNA表达水平低于CML-CP及正常对照组(P＜0.05),而VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA在CML-BC患者中均高于CML-CP及正常对照组(P＜0.05).以MOI=200转染K562细胞3d后Ad-PTEN-GFP组K562细胞内VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平均明显低于Ad-GPF组和未转染组(P＜0.05),PTEN与VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平呈负相关,转染Ad-PIEN-GFP组与转染Ad-GFP组比较VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平分别降低79.12％,82.99％,82.52％,p-Akt及VEGF、MMP-2、MMPO蛋白表达水平分别降低96.15％,80.88％,65.03％,78.99％.结论 PTEN基因可能通过抑制VEGF、MMP-2、MMP-9表达,抑制髓系白血病细胞血管新生及侵袭.
关键词： PTEN基因 血管内皮细胞生长因子 金属基质蛋白酶 白血病 K562细胞系 -
三维应变联合血清MMP-9/TIMP-1评价蒽环类药物化疗后左室收缩功能的改变
目的 应用实时三维应变联合血清MMP-9/TIMP-1评价蒽环类抗肿瘤药物化疗后早期左室整体收缩功能的变化.方法 42例拟行蒽环类抗肿瘤药化疗患者.于化疗前、后累积计量达100、150、200 mg/m2时,应用三维斑点追踪技术分别测量左室整体纵向收缩峰值应变(GLS)、左室整体圆周收缩峰值应变(GCS)、左室整体径向收缩峰值应变(GRS),应用Simpson双平面法计算左室射血分数(LVEF);同时分别测定各时间点血清MMP-9、TIMP-1的含量,并计算MMP-9/TIMP-1,分析其与GLS、GCS、GRS及LVEF的相关性.结果 当药物累积计量达150 mg/m2时,GLS及TIMP-1降低,MMP-9及MMP-9/TIMP-1比值升高(P＜0.05);当药物累积计量达200 mg/m2时,GLS、GCS、GRS均降低,MMP-9及MMP 9/TIMP 1比值升高,TIMP-1水平降低(P＜0.05);当GLS、TIMP-1较累积计量达150 mg/m2时降低(P＞0.05),MMP-9、MMP-9/TIMP-1比值较累积计量达150 mg/m2时升高(P＞0.05),LVEF在整个化疗过程中均不同程度降低,但差异无统计学意义,均在正常范围.MMP 9、MMP 9/TIMP-1比值与GLS、GCS、GRS及LVEF呈负相关,TIMP-1与GLS、GCS、GRS及LVEF呈正相关.结论 三维应变技术可用来早期定量评估蒽环类抗肿瘤药物治疗后左室整体收缩功能的改变,并且MMP-9血清含量及MMP-9/TIMP-1比值随GLS、GCS、GRS及LVEF降低而升高,而TIMP-1含量随GLS、GCS、GRS及LVEF降低而降低.
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脑胶质瘤PS值与MMP-2和MMP-9表达相关性的实验研究
目的 运用CT灌注成像评价大鼠C6脑胶质瘤生长过程中血管通透性的变化及其与MMP-2、MMP-9表达的相关性.方法 采用立体定向方法在30只雌性Wistar大鼠右侧尾状核接种C6细胞,于接种后1 W、2 W、3 W分别进行CT灌注成像,每次检查结束后留取鼠脑标本作病理学检查.结果 各组肿瘤区PS值均比对侧正常脑组织PS值增大(P＜0.01),荷瘤2 W及3 W组肿瘤中心区PS值比相应肿瘤周边区PS值增大(P＜0.01),与荷瘤1 W组比较,荷瘤2 W和3 W组肿瘤中心、肿瘤周边区PS值增大(P＜0.05);肿瘤区MMP-2和MMP-9阳性表达随肿瘤生长而增加;肿瘤周边区PS值与MMP-9表达呈正相关(rx=0.540,P＜0.05).结论 PS值可反映大鼠C6脑胶质瘤生长过程中肿瘤不同区域血管通透性的动态变化,肿瘤周边区域PS值变化与MMP-9表达密切相关.
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整合素β1对牙龈卟啉单胞菌诱导牙龈上皮细胞金属基质蛋白酶-2，9表达的影响
目的：本研究探讨整合素β1对牙龈卟啉单胞菌诱导牙龈上皮细胞MMP-2和MMP-9表达的影响。方法采用 Western blot 和 qRT-PCR 检测牙龈卟啉单胞菌感染前后牙龈上皮细胞MMP-2和MMP-9的表达；通过integrinβ1-siRNA下调牙龈上皮细胞整合素β1的表达，采用Western blot 和 qRT-PCR 检测牙龈卟啉单胞菌感染对照组和整合素β1干扰组的牙龈上皮细胞后 MMP-2和MMP-9表达。结果牙龈卟啉单胞菌感染牙龈上皮细胞可以诱导牙龈上皮细胞 MMP-2和 MMP-9的表达增加，并且表达都是在12 h时达到高峰。下调牙龈上皮细胞整合素β1后，牙龈卟啉单胞菌诱导siRNA-integrinβ1干扰组牙龈上皮细胞MMP-2和MMP-9表达明显减少，与对照组相比存在明显差异（P＜0.01）。结论整合素β1在牙龈卟啉单胞菌诱导牙龈上皮细胞MMP-2和MMP-9表达中起很重要的作用，可能成为治疗牙周炎的新靶点。
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中国人金属基质蛋白酶组织抑制因子-1基因的克隆与表达
目的:克隆和表达中国人金属基质蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinases-1;ⅡMP-1)基因,获得具有抗原性的人TIMP-1蛋白.方法:用RT-nest-PCR扩增TIMP-1编码区基因片段,用基因重组技术构建含该片段的重组质粒并进行序列分析.在大肠杆菌E.coli中表达融合蛋白MBP-TIMP-1,用SDS-PAGE和Western-blot对重组蛋白进行分析鉴定,并用亲和层析试剂盒纯化融合蛋白MBP-TIMP-1.结果:经核苷酸序列分析表明,本研究克隆的中国人TIMP-1为624bp,与报道的国外TIMP-1基因序列同源.经SDS-PAGE和Western blot表明,表达的融合蛋白MBP-TIMP-1分子质量为66Ku,具有TIMP-1的抗原性,并可进行亲和层析纯化.结论:克隆了中国人TIMP-1基因,表达和纯化了具有免疫原性的融合蛋白MBP-TIMP-1,他将对肝纤维化的诊断有一定作用.
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芪苈强心胶囊对大鼠心肌梗死后心肌重构及心功能的影响
目的 探讨芪苈强心胶囊对心肌梗死后大鼠心肌重构及心功能的影响.方法 结扎大鼠左前降支,建立AMI模型,存活者随机分为梗死对照组(MI组)和芪苈强心胶囊治疗组(MI-D组),另设假手术组(Sham组).MI-D组术后4周每天予芪苈强心胶囊生药4 g/kg(生理盐水溶为1.5 ml溶液)治疗,MI组和Sham组仅以等体积生理盐水灌胃,4周后对相关指标进行检测.结果 术后4周大鼠心脏超声及血流动力学均显示左室功能减低;基质金属蛋白酶2,9活性升高;α-MHC/β-MHC mRNA的比值下降.经芪苈强心胶囊治疗后左室功能有明显改善;基质金属蛋白酶2,9活性降低,α-MHC/β-MHC mRNA的比值升高.结论 芪苈强心胶囊治疗AMI可以改善心肌重构和心功能.芪苈强心胶囊治疗有效改善心功能的作用机制至少部分与其抑制心肌重构有关.
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晚期糖基化终产物对血管内皮细胞通透性影响的研究
目的 探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对血管内皮细胞通透性的影响作用. 方法 将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)与不同浓度的糖化牛血清白蛋白(AGE-BSA)共同培养8h,采用ELISA检测细胞培养上清中血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)及金属基质蛋白酶(MMP9)的表达.然后将HUVECs与AGE-BSA100 μg/ml及抗金属基质蛋白酶抗体(MMP9,MMP2)共同作用于单层内皮细胞8h后采用FITC荧光标记白蛋白漏出法测定单层内皮细胞通透率. 结果 与正常对照(NC)组相比,AGE-BSA 50、100 μg/ml组细胞上清中VE-cadherin及MMP9含量明显升高(P＜0.05或P＜0.01).与NC组相比,AGE-BSA组单层内皮细胞通透性增加(P＜0.01);与AGE-BSA组相比,AGE-BSA+ MMP9抗体组单层细胞通透性得到改善(P＜0.05). 结论 AGE-BSA通过诱导MMP9激活,促进VE-cad herin自身解聚,从而导致内皮细胞通透性增高.
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芪参益气滴丸对冠状动脉介入术后炎症因子及心脏不良事件的影响
目的 观察芪参益气滴丸对急性冠脉综合征(ACS)患者经皮冠状动脉介入术(PCI)后炎症因子及主要不良心脏事件(MACE,包括复发心绞痛、急性心肌梗死、严重心律失常、心力衰竭、冠心病死亡)影响.方法纳入60例行PCI的ACS患者,随机分为常规治疗组(n=30)和芪参益气滴丸联合常规治疗组(芪参组,n=30),采用酶联反应吸附法(ELISA法)比较两组术后24h和术后6个月血清高敏C反应蛋白(hs-CRP)、可溶性CD40配体(sCD40L)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平变化,并比较两组6个月MACE事件发生率.结果术后24h两组血清hs-CRP、sCD40L和MMP-9水平均无统计学差异(P＞0.05);6个月后,两组hs-CRP、sCD40L和MMP-9水平分别是3.18±0.71mg/l、5.86±2.01 ng/dl和240.56±60.6 ng/dl.与对照组相比,芪参组血清hs-CRP、sCD40L及MMP-9均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05),随访6个月,芪参组MACE发生率较对照组更低(13.33% vs.26.67%,P＜0.05),且差异有统计学意义.结论 芪参益气滴丸可降低介入术后炎症因子hs-CRP、SCD40L和MMP-9的水平,同时降低MACE近期发生率.
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神经生长因子对人胰腺癌细胞系MIA PaCa-2侵袭能力的初步研究
目的 探讨神经生长因子(β-NGF)对体外人胰腺痛细胞系MIA PaCa-2的黏附、运动及侵袭能力的影响,为研究胰腺癌体内侵袭转移提供理论依据.方法 将一定量β-NGF加入细胞培养液中至不同浓度,以过河实验和趋化运动实验检测癌细胞的运动侵袭能力,以基质浸润实验检测浸润能力,以Western印迹检测E-钙粘连蛋白(E-cadherin)、金属基质蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达的变化,并与对照组比较.结果 细胞培养液中随着加入β-NGF浓度的增加,MIA PaCa-2细胞的趋化能力明显增加(P＜0.05).过河实验中β-NGF组过河时间为(42.50±4.12)h,而对照组为(68.45±3.53)h(P＜0.01).基质浸润实验中50 ng/ml、100 ng/ml、150 ng/ml的β-NGF组分别为(32.61±3.85)/视野、(39.35±5.24)/视野、(47.90±6.82)/视野,对照组为(23.90±4.56)/视野(均P＜0.01).β-NGF组中E-cadherin表达降低、MMP-2蛋白表达增加(P＜0.05).结论 β-NGF可降低E-cadherin蛋白表达、增加MMP-2蛋白表达,降低胰腺癌细胞间的黏附性,增加胰腺痛细胞系MIAPaCa-2的侵袭能力.提示β-NGF可能介导了胰腺癌的浸润转移.
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胃癌淋巴结转移分子标志物的研究进展
胃癌是常见的恶性肿瘤之一,据2015年资料统计[1] ,我国每年胃癌新发病例约67.9万,同期死亡人数高达49 .8万,发病率和死亡率在恶性肿瘤中均高居第二. 大部分胃癌患者就诊时处于中晚期,5年生存率只有不到5%[2]. 淋巴结转移是胃癌常见的转移形式,即使在早期胃癌阶段,淋巴结转移率仍可达18.3%[3]. 淋巴结转移是导致胃癌预后较差的重要原因,也是影响胃癌治疗方式的关键因素.目前CT和超声内镜等影像学检查诊断胃癌淋巴结转移的敏感性和准确性均不理想,前哨淋巴结活检技术未广泛应用于临床,因此寻找能够准确预测胃癌淋巴结转移的标志物成为近年来研究的热点. 既往研究报道的胃癌淋巴结转移标志物特异性不强,临床应用受限,包括E钙黏蛋白、整合素等细胞黏附分子,金属基质蛋白酶、转化生长因子、血管内皮生长因子、趋化因子等细胞因子,以及nm23、mta-1、c-met等淋巴结转移相关基因. 因此,筛选具有较高灵敏度和特异度的分子标志物是目前临床亟待解决的问题,将有助于阐明胃癌淋巴结转移的分子机制及开展靶向治疗,从而改善预后. 本文对近年来新发现的与胃癌淋巴结转移密切相关且有重要意义的分子标志物及其可能的作用机制进行综述.
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端粒酶阴性和阳性肿瘤细胞侵袭能力的差异及机制研究
目的 研究端粒酶阴性不依赖端粒酶端粒维持旁路(ALT)细胞与端粒酶阳性肿瘤细胞侵袭能力差异.方法 应用Transwell法检测7种端粒酶阴性ALT细胞系和7种端粒酶阳性细胞系的侵袭能力,应用Oligo基因芯片技术和实时定量RT-PCR分析两类细胞的金属基质蛋白酶家族的表达差异.结果 端粒酶阴性ALT细胞系的侵袭能力显著低于端粒酶阳性肿瘤细胞.端粒酶阴性ALT细胞系的MMP-1、MMP-7的表达显著低于端粒酶阳性肿瘤细胞,而TIMP-1、-2、-3显著高于端粒酶阳性肿瘤细胞.结论 端粒酶阴性ALT细胞系的侵袭能力显著低于端粒酶阳性肿瘤细胞,这是端粒酶阴性ALT肿瘤预后好于端粒酶阳性肿瘤的重要原因之一,MMP-1和MMP-7的低表达以及TIMP-1、-2、-3的高表达是其侵袭能力低的重要机制.
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子宫内膜MMP-3表达和子宫腺肌病痛经的关系研究
目的 研究基质金属蛋白酶(MMP-3)在子宫腺肌病中的表达,探讨其表达与子宫腺肌病的发生及痛经的相关性.方法 应用免疫组化SP染色法检测45例子宫腺肌病在位内膜,36例异位内膜及28例对照组子宫内膜MMP-3的表达.结果 MMP-3在子宫腺肌病异位内膜组中的表达显著高于子宫腺肌病在位内膜组及对照组(P<0.05).子宫腺肌病中在位内膜增殖期和分泌期表达强度比较,差异无统计学意义(P>0.05).MMP-3在子宫腺肌病异位内膜组中的表达与子宫腺肌病患者痛经有相关性(r=0.557,P<0.05).结论 MMP-3的异常表达可能与子宫腺肌病的发生有关;异位内膜MMP-3的过度表达可能与子宫腺肌病痛经的发生有关.
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基质金属蛋白酶与子宫内膜癌关系的研究
子宫内膜癌是女性生殖道常见的恶性肿瘤之一,倍受妇产科学界关注.目前已经发现金属基质蛋白酶(MMPs)在许多肿瘤的发生和发展中起重要作用,但对子宫内膜癌的研究甚少.本研究拟通过检测MMPs在正常子宫内膜、子宫内膜癌前病变,子宫内膜癌组织中的表达情况,探讨基质金属蛋白酶(MMPs)及钙粘蛋白(E-CAD)在子宫内膜癌发病方面的价值.
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金属基质蛋白酶-26在妊娠早期和中期原代细胞滋养细胞中的表达
在早孕期间,胚胎植入对成功妊娠的意义重大,胚胎植入开始于绒毛内细胞滋养细胞向子宫肌层浸润,正确的胎盘滋养细胞浸润是要求绒毛滋养细胞侵入子宫蜕膜深达螺旋动脉的过程,在时间和空间上有严格的调控[1].
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丙戊酸钠调节组蛋白乙酰化对肝癌细胞浸润转移影响的研究
目的:探讨应用组蛋白脱乙酰酶(his-tone deacetylase,HDAC)抑制剂丙戊酸钠(val-proate acid sodium,VPA)调节组蛋白乙酰化水平对肝细胞性肝癌细胞侵袭、迁移能力的影响及其可能作用机制.方法:采用肿瘤细胞体外迁移实验和Transwell小室体外侵袭模型评价HDAC抑制剂VPA对HepG2细胞浸润转移能力的影响.进一步应用间接免疫荧光技术检测HepG2细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达来探讨其作用机制.结果:细胞培齐24 h后,对照组迁移细胞数目较多,为(142±16.5)个,而(0.75～4.0)mmol/L VPA试验组细胞迁移数目随药物浓度升高而逐渐由(125±12.4)个减少(42±6.1)个,差异有统计学意义,P<0.001;对照组穿过聚碳酯膜细胞数目(85±7.8)个,明显高于药物实验组(69±6.9～18±3.6)个,差异有统计学意义,P<0.001;与对照组比较,试验组MMP-2、MMp-9蛋白表达被明显下调,并且与肿瘤细胞迁移、侵袭的变化密切相关.结论:应用HDAC抑制剂逆转染色体组蛋白低乙酰化水平可显著抑制肝癌细胞侵袭转移,下调MMP-2和MMP-9表达可能是其发挥作用的主要机制之一.
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