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孕酮回植激活Akt/GSK3β信号通路逆转月经发生
目的 探讨在孕酮撤退月经模型小鼠月经发生的关键时期前,回植孕酮对蛋白激酶B/糖原合成激酶3β(Akt/GSK3β)信号通路的影响. 方法 30只成熟去势雌性C57BL/6J小鼠在建成小鼠孕酮撤退月经模型的基础上,随机分为3组:孕酮撤退后12 h组(12 h组)、孕酮撤退后16 h组(16 h组),以及在孕酮撤退后12 h回植孕酮皮埋管4 h组(回植孕酮组),每组10只.通过qRT-PCR法检测子宫内膜组织中Akt、GSK3β mRNA表达,Western blotting和免疫组织化学检测总Akt(t-Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)(Ser473)和p-GSK3β(Ser9)蛋白的表达. 结果 与12 h组相比,回植孕酮组和16 h组中Akt mRNA表达显著下降(P均<0.05),而回植孕酮组和16 h组无显著性差异(P>0.05);12 h组的GSK3β mRNA表达量显著高于回植孕酮组和16 h组(P均<0.05).与12 h组相比,p-Akt、p-GSK3β蛋白在回植孕酮组表达量显著增高(P均<0.05);而16 h组子宫内膜组织中p-Akt、p-GSK3β蛋白表达量亦显著低于12 h组和回植孕酮组(P均<0.05).免疫组化结果显示,p-Akt和p-GSK3β蛋白在小鼠子宫组织中表达分布呈现相似的模式,主要广泛散在表达于蜕膜化区域的基质细胞及腺上皮和腔上皮细胞中,在蜕膜化区域周边稍有集中分布呈带的趋势. 结论 在月经发生关键时期之前回植孕酮可能通过非转录机制快速激活Akt/GSK3β信号通路及其下游级联反应,从而逆转月经发生.
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金属基质蛋白酶MMP3和MMP7在小鼠药理性孕酮撤退月经模型中的定位
目的 本研究旨在研究金属基质蛋白酶(MMPs)在小鼠药理性孕酮撤退月经模型中的定位. 方法 卵巢切除的小鼠在诱导蜕膜化之后给予米非司酮处理,免疫组化检测金属基质蛋白酶MMP3和MMP7定位. 结果 MMP3从米非司酮处理后0h到24 h,存在于腔上皮下的局部基质、上皮、蜕膜化区域以及基底层和功能层的交界处；从32 h到48 h存在于腔上皮以及其下基质区域.MMP7从0h到24 h存在于基底层,上皮和中间蜕膜化区域,从32 h到48 h与MMP3的定位相一致. 结论 MMP3和MMP7蛋白质在此模型中定位呈区域性分布.
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肿瘤坏死因子在小鼠药理性孕酮撤退月经样模型中的定位和表达
目的 在药理性撤退小鼠月经样模型中,观察孕酮撤退后,肿瘤坏死因子(TNF-α)的定位和表达情况.方法 卵巢切除的小鼠在诱导蜕膜化之后给予米非司酮即通过拮抗孕酮受体的方法(药理性撤退),导致孕酮撤退,并用免疫组化的方法观察米非司酮处理的不同时相,TNF-α在小鼠子宫内膜的定位；用实时PCR的方法观察TNF-α表达情况.结果 免疫组化结果显示米非司酮处理后0～8 h,TNF-α主要存在于腔周围的血管内皮细胞；12～16 h,主要存在于内流的白细胞；24～48 h,主要存在于崩解组织边缘的间质细胞区域和修复好腺上皮细胞周围的间质细胞.实时PCR结果显示TNF-α mRNA在孕酮撤退后24 h内都有表达,并且TNF-a表达量逐渐增高,在12h、16h达到峰值. 结论 在此小鼠月经样模型中,米非司酮处理即孕酮撤退后TNF-α在此模型子宫中定位呈区域性分布,并诱导TNF-α表达升高,可能参与了子宫内膜的崩解.
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益母草碱对小鼠生理性月经样模型崩解期的作用
目的:研究益母草碱对小鼠生理性月经样模型的作用.方法:建立小鼠生理性月经样模型,将人工蜕膜化的假孕小鼠双侧卵巢切除,引发孕酮(P4)撤退,随后蜕膜化子宫内膜发生崩解坏死,模型小鼠出现月经样出血.在P4撤退前至撤退后24h,给予模型小鼠益母草碱,观察P4撤退后小鼠阴道出血状态,子宫大体形态以及组织形态学变化.结果:模型小鼠均在P4撤退后12～ 24h观察到阴道出血.与空白对照组相比,P4撤退后24h益母草碱药物处理组小鼠子宫颜色较深,子宫充血较显著.小鼠子宫腔上皮下的血管显著扩张,特别是腔上皮下血管扩张与红细胞渗出严重,且范围较对照组更广.通过统计学分析证实,益母草碱组充血面积高于对照组(P=0.011).结论:提示益母草碱可导致小鼠子宫内血管扩张与红细胞渗出,其中的药理作用和分子机制有待进一步研究.
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小鼠药理性月经模型中孕酮撤退激活NF-κB状态研究
目的:研究在小鼠药理性月经样模型中,阻断孕酮作用后子宫内膜组织崩解过程中核转录因子NF-κB激活状态.方法:切除卵巢后小鼠在诱导蜕膜化之后给予米非司酮处理模拟月经样出血,取部分子宫组织采用免疫组织化学、蛋白质印迹方法检测米非司酮处理(即孕酮撤退)后不同时期NF-κB激活及NF-κB上游信号分子的表达.结果:免疫组化结果显示,阻断孕酮作用后NF-κB p65显著入核,p50入核不明显.蛋白印迹实验显示,p50和p65蛋白发生了核浆转移,在孕酮撤退12h后核蛋白中表达量高.NF-κB诱导性激酶、磷酸化IKK-β、磷酸化IκB-α在阻断孕酮作用后的各个时期都有表达,且各时相表达均有差异.结论:孕酮撤退可能通过NF-κB诱导性激酶、磷酸化IKK-β,继而磷酸化IκB-α通路激活NF-κB.
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生理性孕酮撤退过程中小鼠子宫角组织蛋白激酶B、糖原合成激酶3β的表达观察
目的 观察生理性孕酮撤退小鼠子宫角组织中蛋白激酶 B(Akt)及糖原合成激酶3β(GSK3β)的表达变化.方法 90只未交配健康成年雌性C57BL/6J小鼠,制作生理性孕酮撤退模型,分别在孕酮撤退0、8、12、16、20、24、32、40、48 h(48 h为小鼠生理性孕酮撤退周期)时处死10只小鼠,收集子宫角组织.采用real-time PCR法检测孕酮撤退各时点小鼠子宫角组织Akt、GSK3β mRNA,采用Western blotting法检测孕酮撤退各时点小鼠子宫角组织总蛋白激酶 B(t-Akt)、磷酸化蛋白激酶 B(Akt)及3βp-Akt及磷酸化糖原合成激酶(p-GSK3β).结果 随孕酮撤退时间延长,Akt mRNA及蛋白相对表达量逐渐降低,孕酮撤退20 h时达到低值,后随孕酮撤退时间逐渐延长,Akt mRNA及蛋白相对表达量逐渐升高.孕酮撤退8 h 时GSK mRNA及蛋白相对表达量高于孕酮撤退0 h时(P<0.05);随孕酮撤退时间延长,GSK mRNA及蛋白相对表达量逐渐降低,孕酮撤退24 h时达到低值,后随孕酮撤退时间逐渐延长, GSK mRNA及蛋白相对表达量逐渐增加.孕酮撤退20 h小鼠子宫角组织 Akt 、GSK3β mRNA表达量低于孕酮撤退后0、48 h(P均<0.05).与孕酮撤退0 h比较,孕酮撤退20 h时小鼠子宫角组织p-Akt、p-GSK3β的相对表达量均降低(P均<0.05).与孕酮撤退8 h比较,孕酮撤退20 h时小鼠子宫角组织p-GSK3β的相对表达量降低(P<0.05).与孕酮撤退20 h比较,孕酮撤退48 h时小鼠子宫角组织p-Akt、p-GSK3β的相对表达量均升高(P均<0.05).结论 生理性孕酮撤退小鼠子宫角组织中存在Akt表达随时间下降后上调,GSK3β表达随时间上调后下降后再次上调. Akt/GSK-3β信号通路可能在鼠孕酮撤退过程中起重要作用.
