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聚乙烯业胺文献资料
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流式细胞仪分选非染色S期CHO细胞有助于提高聚乙烯亚胺的转染效率
目的 利用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分选获得非染色、同步化的中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞,观察聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)在不同周期CHO细胞的瞬时转染和稳定转染效率.方法 悬浮培养CHO DG44细胞,应用流式细胞仪的光学参数-前向角和侧向角,在细胞主群中设置12个门,然后进行分选.分选出的各门内细胞经碘化丙啶(P1)染色进行细胞周期检测.以PEI为载体分别向含G0/G1、S、G2/M比例较高的细胞亚群和未经分选的细胞转染含绿荧光蛋白(Green Fluorescence Protein,GFP)质粒,利用流式细胞仪检测瞬时转染、稳定转染效率.结果 细胞DNA含量与侧向角相关,各细胞哑群G0/G1期细胞所占比例总体上随着侧向角的增大而减小,G2/M细胞所占比例随着侧向角的增大而增多.低侧向角的细胞业群P2内G0/G1期细胞比例可达80.49%,中侧向角的细胞亚群P7内s期细胞比例可达61.14%,高侧向角的细胞亚群P13内G2/M期细胞比例町达49.88%.转染48h,GFP阳性细胞在G2/M期细胞比例较高的细胞亚群所占比例高,但瞬时转染效率,S期细胞比例较高的细胞群大于G2/M期细胞比例较高的细胞群.转染2w,稳定转染效率仍为S期细胞比例较高的细胞亚群大于其它细胞亚群及未分选的混合细胞群.结论 应用流式细胞仪的光学参数可以有效分选非诱导、无染色分别含有较高比例各周期时相的CHO细胞;PEI的转染效率与转染时细胞所处的细胞周期时相相关,且S期细胞亚群的瞬时和稳定转染效率均高于其它细胞周期亚群.
