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IN-1重组单链抗体文献资料
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IN-1重组单链抗体基因的克隆和序列分析
目的应用基因工程技术获得人工设计的IN-1重组单链抗体(IN-1-scFv)的cDNA克隆.方法参照genebank中发表的IN-1抗体的轻链重链序列,重新设计适于在大肠杆菌中表达的目的基因片段,将该基因双链分成35个小片段合成,经退火、复性连接成目的片段后,克隆到经过BamHI和HindIII双酶切的克隆载体pUC18中,并转化大肠杆菌DH5a,抽提重组子pUC18/744进行克隆PCR、酶切鉴定及测序分析.结果测序结果证明获得的基因序列与实验设计仅差一个碱基.结论正确设计并合成了IN-1重组单链抗体(IN-1-scFv)的cDNA,为深入研究其生物活性奠定了基础.
关键词： IN-1重组单链抗体 基因合成 克隆 -
IN-1重组单链抗体表达载体的构建与融合表达
目的: 设计并人工合成IN-1重组单链抗体(recombinant IN-1 single-chain antibody)的cDNA克隆,构建其表达载体,在原核系统中实现初步表达.方法:根据gene bank中发表的IN-1抗体的轻链重链序列,重新设计适于在大肠杆菌中表达的基因片段,该基因双链分35个小片段合成,经退火、复性连接成目的片段后,克隆到克隆载体pUC-18中,经全自动序列分析仪测序证实后,再亚克隆至表达载体pET-28a(+),转化大肠杆菌BL21,诱导表达.结果:测序结果合成的基因序列与设计的仅差一个碱基;SDS-PAGE检测显示,表达出相对分子量31 kd的融合蛋白.结论:IN-1重组单链抗体基因表达载体的构建和表达,为深入研究其生物活性奠定了基础.
关键词： IN-1重组单链抗体 原核表达 融合蛋白
