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慢病毒载体介导的RNA干扰抑SUPC12细胞MyD88基因的表达
目的 研究慢病毒介导的RNA干扰对PC12细胞的转染效率和对MyD88基因的抑制效率.方法 构建针对大鼠MyD88基因3个靶点的ShRNA慢病毒载体,PC12细胞按照不同的转染条件分为正常组(DMEM完全培养液)、DMEM加入polybrene组、EN.iS(Enhance infection solution)组、EN.iS加入polybrene组.荧光显微镜下观察不同组的转染效率,采用Real-time PCR和Western blot检测不同的靶点对MyD88的不同沉默效率.结果 病毒滴度为1×108 TU/ml,MOI为100时,PC12细胞在EN.iS组的转染效率高,转染试剂polybrene对转染效率无明显影响,沉默效率高的靶点是5'-CATAC GCAACCAGCAGAAA-3''.结论 慢病毒介导的RNA干扰是一种高效的基因沉默手段,可以对PC12细胞中MyD88的功能进行长期的研究.
关键词： PC12细胞 慢病毒 RNA干扰 髓样分化因子初次应答基因88 -
Toll样受体在缺血性脑损伤中的研究进展
一、引言大脑是一个高耗氧的器官,其重量为体重的2％,消耗的氧气却占总需氧量的20％,其中大部分用以产生足够的能量(即三磷酸腺苷)来维持电化学梯度和重要的神经功能.因此,由大脑栓塞、血栓以及大脑低灌注引起的血流量不足将会严重影响周围组织的糖氧供应,从而造成严重的脑损伤甚至脑死亡[1].脑卒中是导致死亡的一大主要原因,其主要分为出血性和缺血性两种类型,后者占脑卒中患者总数的87％[2].对于缺血性脑卒中,血栓溶解疗法是唯一的药物学治疗方法,其中应用为广泛的是重组组织型纤维蛋白酶原激活剂(recombinant tissue plasminogen activator,rt-PA),这种激活剂可以将纤维蛋白溶酶原转换为纤维蛋白溶酶,而后者可以破坏血块中的纤维蛋白从而溶解血栓[3].Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)是一类模式识别受体,能够激活固有免疫系统对抗外源微生物[4-5].无论在感染性或者非感染性缺血性脑损伤中,TLR均起到至关重要的作用.本文旨在阐述TLR及其配体的结构、信号通路以及与缺血性脑损伤之间的联系,并探寻治疗缺血性脑损伤的新思路.
关键词： Toll样受体 脑缺血 髓样分化因子初次应答基因88
