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纳米Ag-SiO2导尿管的细胞毒性评价
背景:具有抗菌活性的纳米Ag-SiO2导尿管可有效降低普通医用导尿管相关性尿路感染的发生率,其物理、化学性质发生很大变化,所以对其安全性需重新评价.目的:比较纳米Ag-SiO2导尿管和普通医用导尿管浸提液对兔尿道上皮细胞的体外细胞活性影响,初步评价纳米Ag-SiO2导尿管的生物安全性.方法:应用机械分离与酶消化法分离培养兔尿道上皮细胞,在体外行扩增后制成细胞悬液,将培养液更换为浸泡纳米Ag-SiO2导尿管及普通导尿管的培养液,采取四甲基偶氮唑盐比色法量化两组浸提液对兔尿道上皮细胞的体外细胞毒性.用酶联免疫检测仪分别测定两组体外细胞的吸光度值,并计算其相对增殖率(RGR),进行毒性评价及比较.结果与结论:纳米Ag-SiO2导尿管和普通医用导尿管均毒性轻微.纳米Ag-SiO2导尿管与普通医用导尿管相对增殖率均数间差别无显著性意义(P > 0.05).结果表明,纳米Ag-SiO2导尿管对细胞的生长繁殖同普通医用导尿管一样影响轻微,无(或)低细胞毒性,符合医疗器械生物学评价标准要求.
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尿道移行上皮细胞与生物可降解尿道支架体外复合培养的研究
目的:研究体外培养的兔尿道上皮细胞在生物可降解性网状尿道支架上的贴附和生长增殖情况,观察其对尿道上皮细胞形态和功能的影响,利用组织工程技术培养种植细胞的尿道内支架.方法:应用机械分离与酶消化法分离培养兔尿道移行上皮细胞,并在体外行原代培养与扩增后制成细胞悬液接种在网状尿道支架上,形成尿道移行上皮细胞-支架复合物.采用免疫组织化学、荧光染色法鉴定尿道上皮细胞及其活性;采用倒置显微镜、扫描电镜观察尿道上皮细胞在支架表面吸附与生长状态.结果:网状尿道支架具有良好的生物相容性,能使尿道移行上皮细胞增殖,不影响其活性.尿道移行上皮细胞在尿道支架上贴附生长良好,1～2天后完伞贴壁,3～7天细胞生长增殖活跃,支架网眼风充满上皮细胞,长期培养仍保持尿道移行上皮细胞特性,扫描电镜可见上皮细胞与网状支架贴附紧密,适度伸展并有基质分泌.结论:网状尿道支架适合尿道移行上皮细胞黏附生长,可作为尿道组织工程的细胞载体,利用组织工程方法可获得适于移植尿道细胞的组织工程化尿道.
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尿道移行上皮细胞与生物可降解尿道支架体外复合培养的研究
目的:研究体外培养的兔尿道上皮细胞在生物可降解性网状尿道支架上的贴附和生长增殖情况,观察其对尿道上皮细胞形态和功能的影响,利用组织工程技术培养种植细胞的尿道内支架.方法:应用机械分离与酶消化法分离培养兔尿道移行上皮细胞,并在体外行原代培养与扩增后制成细胞悬液,接种在网状尿道支架上,形成尿道移行上皮细胞-支架复合物.应用免疫组织化学、荧光染色法鉴定尿道上皮细胞及其活性,并用倒置显微镜、扫描电镜观察尿道上皮细胞在支架表面吸附与生长状态.结果:网状尿道支架具有良好的生物相容性,能使尿道移行上皮细胞增殖,不影响其活性.尿道移行上皮细胞在尿道支架上贴附生长良好,1～2天后完全贴壁,3～7天细胞生长增殖活跃,支架网眼内充满上皮细胞;长期培养仍保持尿道移行上皮细胞特性,扫描电镜可见上皮细胞与网状支架紧密贴附,适度伸展并有基质分泌.结论:网状尿道支架适合尿道移行上皮细胞黏附生长,可作为尿道组织工程的细胞载体,利用组织工程方法可获得适于移植尿道细胞的组织工程化尿道.
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生物可降解尿道支架种植尿道移行上皮细胞的研究
我们应用人工合成的生物可降解性单纯型尿道内支架修复战伤性尿道狭窄,证实该材料及方法是可行的[1].本实验旨在将自体的尿道上皮细胞体外培养后,种植于单纯尿道内支架上,制备成附有自体尿道上皮细胞的复合型尿道内支架,为修复尿道损伤提供较实用有效的治疗方法.
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以L929细胞为滋养层的尿道黏膜上皮细胞体外培养
目的探索尿道黏膜上皮细胞体外培养的技术和方法,为进一步采用组织工程技术构建尿道黏膜组织奠定基础,并为尿道黏膜的生理、药理、毒理学及微生态研究提供实验模型. 方法取刚离乳的雄性新西兰幼兔尿道黏膜组织,分别以DispaseⅡ消化液和混合消化液消化成单细胞悬液,以差速贴壁法排除成纤维细胞,接种后以L929细胞为滋养层细胞进行培养,定期换液,细胞生长、增殖至80%～90%融合时传代.细胞进行常规HE染色、流式细胞仪检测,以扫描电镜、透射电镜观察其超微结构.再分别设立实验组(n=20)、阳性对照组(正常尿道黏膜组织石蜡切片,n=20)及阴性对照组(成纤维细胞铺片,n=20)行免疫组织化学染色. 结果原代培养10天左右细胞逐渐生长融合成片,如铺路石状,细胞大小均一.上皮细胞为二倍体细胞,生长期内均为单一的上皮细胞,无成纤维细胞混杂生长,细胞可传11～13代,成活50～60天. 结论新西兰幼兔尿道黏膜上皮细胞可在体外进行培养,在一定时间内保持增殖活力,为构建组织工程化尿道奠定了基础,且为尿道黏膜的体外研究提供了实验模型.
