首页 > 文献资料
-
冲击波通过ATP释放、P2受体及激活p38MAPK激酶促进T细胞增殖和分泌白细胞介素2
背景:以往研究发现,冲击波可通过激活有丝分裂原激活蛋白激酶p38(p38MAPK),增强CD3和CD28激活的T细胞增殖和分泌白细胞介素2.目的:观察细胞内的ATP向外释放,是否为冲击波增强T细胞功能的潜在机制.设计:以细胞为观察对象,分组对照重复测量观察.单位:吉林大学第一医院骨科研究室.材料:KDE-2001体外冲击波碎石机(北京中科建安医疗技术公司制造).MAPKp38抑制剂:SB203580 1 mg(BioSource Inc.,Camarillo,CA);检测磷酸化的p38MAPK试剂盒(Cell Signaling Tehchmology,Inc.U.S.A.);P2受体抑制剂:suramin 50 mg(BIOMOL Research Laboratories Inc,PA),用1.749 2 mL的IMDM培养基将50 mg的suramin配成0.02 mol/L的溶液.ATP酶:apyrase 200 U(Sigma,U.S.A.);P2X7受体阻滞剂:KN-62(BioSource Inc.,Camarillo,CA);p38 MAPK抑制剂:SB203580 1 mg(BioSource Inc.,USA*542 Flynn Roas,Camarillo,CA);检测ATP的生物荧光试剂盒/ATP Bioluminescence Assay Kit CLS Ⅱ(Roche Diagnostics GmbH,Mannheim,Germany).方法:实验于2005-01/2006-12在吉林大学第一医院骨科研究室完成.①采用体外冲击波碎石机(工作电压7 kV、电容0.3μF时,冲击波正相压强23 MPa,能量密度0.18 mJ/mm2)作用于T细胞,冲击波作用50～400次.②用特异性的ATP试剂盒检测低能冲击波是否引起T细胞(人外周血单个核细胞和Jurkat T细胞)分泌ATP.③设无拮抗剂和抑制剂的阴性对照组.用人外周血单个核细胞检测低能冲击波对激活的T淋巴细胞增殖的影响,用Jurkat细胞检测低能冲击波对T淋巴细胞分泌白细胞介素2的影响,用抗-p38 MAPK抗体及抗-磷酸化的p38MAPK(Thr180/Tyr182)抗体通过免疫印迹法测定Jurkat T细胞上的p38 MAPK的表达及磷酸化.主要观察指标:T细胞外的ATP含量、细胞悬液中的白细胞介素2的含量、细胞的增殖和细胞p38MAPK的磷酸化程度.结果:①冲击波作用100,150,200,250,300,360和400次时较无冲击波作用时细胞外的ATP的含量明显增加(P＜0.01),并且ATP的增加含量和冲击波的作用次数有依从关系.②加入apyrase,KN-62,suramin的植物血凝素激活的外周血单个核细胞细胞或CD3和CD28激活的Jurkat T细胞,在能量密度为0.18 mJ/mm2的冲击波作用100,150,200,250,300,330次时,细胞对3H-TdR掺入量比没有加入apyrase、KN-62或suramin的阴性对照组低(P＜0.01),细胞上清液中的的细胞介素-2的活性含量表现为明显增高(P＜0.01).加入ATP、KN-62或suramin后,冲击波激活Jurkat T细胞的p38 MAPK的程度明显降低.结论:①低能冲击波能损伤细胞膜而不损伤其他细胞器,引起T淋巴细胞内的ATP过多向细胞外分泌,细胞外过量的ATP过多地激活了P2X7受体,激活细胞内的大量的p38 MAPK,后磷酸化的p38MAPK作为协同刺激因子增强激活的T淋巴细胞增殖及分泌白细胞介素2.②在低能冲击波对T淋巴细胞的功能调节上,T细胞分泌的ATP起到非常重要的作用.
关键词： 促分裂原活化蛋白激酶p38 白细胞介素2 T细胞增殖 ATP -
P38信号转导通路对蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛的影响
目的:探讨促分裂原活化蛋白激酶P38(P38 MAPK)在兔蛛网膜下腔出血(SAH)后迟发性脑血管痉挛(CVS)中的作用.方法:35只新西兰白兔随机分为对照组(n=5),SAH组(n=10)、SAH+DMSO(n=10)、SAH+SB203580组(n=10),采用枕大池二次注血的方法建立SAH模型.分别在注血后第5天、第7天活体灌注处死,留取基底动脉标本.用免疫组织化学、测量基底动脉横截面积的方法检测P38 MAPK的表达和CVS程度的变化.结果:5 d处死的SAH组、SAH+DMSO组兔基底动脉横截面积与对照组相比有统计学意义(P＜0.01),平滑肌细胞P38 MAPK的表达与对照组相比显著增强(P＜0.01);5 d处死的SAH+SB203580组CVS明显缓解(P＜0.01),平滑肌细胞P38 MAPK的表达减弱.结论:SAH后兔基底动脉平滑肌细胞内激活的P38 MAPK诱导了迟发性CVS的产生;SB203580能够有效的缓解基底动脉平滑肌持续性的收缩.
关键词： 促分裂原活化蛋白激酶p38 蛛网膜下腔出血 脑血管痉挛 信号转导
