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聚N-异丙基丙烯酰胺改性聚苯乙烯培养皿:以温度变化控制细胞的分离
背景:在组织工程研究中,常用的细胞分离方法是胰蛋白酶消化,但是这种方法可能破环细胞外基质蛋白造成细胞活性降低,因此研制一种避免酶消化的细胞分离技术将有重要的意义.目的:利用聚N-异丙基丙烯酰胺能够随温度变化疏水性的特性,建立一种基于温度敏感性控制细胞分离技术.方法:配制质量浓度为55%的异丙基丙烯酰胺异丙醇溶液,均匀涂抹在聚苯乙烯培养皿表面,然后通过电子束照射的方法接枝于培养皿表面.用原子力显微镜观察接枝前后聚苯乙烯培养皿表面微观结构,静滴法测量不同温度下接枝前后聚苯乙烯培养皿表面的水接触角,聚N-异丙基丙烯酰胺接枝后培养皿在不同温度下细胞分离能力变化.结果与结论;原子力显微镜观察发现聚苯乙烯培养皿表面上形成薄层致密的聚N-异丙基丙烯酰胺聚合物;在37℃时聚N-异丙基丙烯酰胺接枝培养皿与未接枝培养皿水接触角差异无显著性意义,在20℃时聚N-异丙基丙烯酰胺接枝培养皿的水接触角明显低于未接枝培养皿;在37℃时细胞能正常的在温度敏感性培养皿上贴壁生长,在20℃时大量细胞从培养皿底面脱离悬浮在培养基中.结果说明聚N-异丙基丙烯酰胺接枝培养皿表面可以利用温度的改变控制细胞的分离,此技术有望在组织工程中发挥重要的作用.
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微沟槽图形结构对硅橡胶表面性能和细胞相容性的影响
目的 制作具有微沟槽图形的硅橡胶(silicone rubber,SR)表面改性材料,检测改性前后材料表面理化性质,初步评价细胞相容性.方法 利用具有微沟槽图形的方形母版,采用浇灌的方法成功制作表面具有微沟槽图形的硅橡胶改性材料,同时进行碳离子注入处理,并采用扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)、原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)、水接触角等技术测量改性前后硅橡胶的表面理化性质.通过细胞黏附实验、CCK-8细胞增殖实验以及Western blot等技术观察人真皮成纤维细胞的生长情况以及Talin、Zyxin蛋白的表达.结果 AFM观察到各组材料表面形貌出现明显的差异,微沟槽硅橡胶(patterned SR,P-SR)以及微沟槽-碳硅橡胶(patterned carbon ion implanted SR,PC-SR)均可在表面见微沟槽图形,而碳硅橡胶(carbon ion implanted SR,C-SR)出现不规则凸凹结构.水接触角显示材料进行微沟槽图形化处理后,可增加材料的水接触角.细胞黏附和增殖实验提示对材料进行微沟槽图形化处理后,细胞的黏附和增殖能力较C-SR降低,但两者差异无统计学意义.免疫荧光观察到人真皮成纤维细胞在P-SR和PC-SR组排列有序.Western blot检测细胞黏附相关蛋白Talin、Zyxin的表达在C-SR和PC-SR组高于SR组(P＜0.05).结论 微沟槽图形可影响硅橡胶的表面性能和细胞的增殖、排列等功能,对减轻包膜挛缩发生率起到积极作用.
