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肝细胞生长因子诱导前软骨干细胞向软骨细胞的分化
目的:探讨肝细胞生长因子诱导前软骨干细胞向软骨细胞分化的机制.方法:实验于2005-12/2006-03在河南省正骨研究院完成.①实验材料:普通级新生兔10只,平均体质量3 kg.②实验干预:采用免疫磁珠分离技术分离新生兔长骨干骺端前软骨干细胞.利用肝细胞生长因子(浓度分别为0.5,1,2,4 μg/L)作用前软骨干细胞;另以2μg/L肝细胞生长因子作用前软骨干细胞,对照用相同剂量的培养基,检测前软骨干细胞Ⅱ型胶原及Ⅱ型胶原mRNA的表达.③实验评估:采用光学显微镜观察前软骨干细胞形态及生长情况;四甲基偶氮唑盐比色法检测前软骨干细胞的增殖;免疫荧光检测Ⅱ型胶原表达;反转录-聚合酶链反应检测Ⅱ型胶原mRNA的表达.结果:①前软骨干细胞形态及生长情况:分离纯化的前软骨干细胞贴壁稳定,在光学显微镜下呈多角和梭形,生长旺盛,曲光度好.②前软骨干细胞增殖情况:细胞增殖率上升,在24,48,72 h内呈时间浓度依赖.③Ⅱ型胶原表达:肝细胞生长因子作用第5天前软骨干细胞出现Ⅱ型胶原蛋白的表达.④Ⅱ型胶原mRNA的表达:在肝细胞生长因子刺激3 d开始出现表达,并且5 d,7 d逐渐增加.结论:肝细胞生长因子作用前软骨干细胞后,出现软骨特征标志抗原Ⅱ型胶原的表达,细胞增殖活性上升,表明肝细胞生长因子能诱导前软骨干细胞向软骨细胞方向分化.其机制可能是前软骨干细胞也存在肝细胞生长因子受体.
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外源性转化生长因子β1对胎儿软骨终板细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖的影响
[目的]观察外源性转化生长因子-β1(TGF-β1)对胎儿软骨终板细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖的影响.[方法]用含10 μg/L外源性TGF-β1培养基培养第2代胎儿软骨终板细胞,分别培养0 d、1 d、2 d 、3 d、4 d、5 d、6 d.Western-blot和RT-PCR检测培养细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖及其mRNA的表达.[结果]d0与d1之间相比较,d4、d5与d6之间相互比较,Ⅱ型胶原和蛋白多糖及其基因表达的差异皆无统计学意义(P＞0.05);d1、d2、d3、d4之间相互比较,Ⅱ型胶原和蛋白多糖及其基因表达的差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]TGF-β1能促进体外培养的胎儿软骨终板细胞合成Ⅱ型胶原和蛋白多糖,且在1～4 d范围内呈时间依赖性.
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兔关节软骨细胞的分离、培养和形态学特征
[目的]探讨兔关节软骨细胞的分离、培养方法,观察单层高浓度培养时细胞表型表达情况.[方法]无菌条件下,从 2周龄新西兰白兔的颞颌关节及四肢关节髁突面削取软骨片,采用机械-酶消化法分离软骨细胞,经台盼蓝拒染计数,将细胞按 1× 106个 /孔接种于 6孔培养板,传代培养,描绘生长曲线.利用相差显微镜及透射电镜观察细胞形态.应用甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组化对细胞进行鉴定.[结果]每克软骨能获取 1 5× 106个软骨细胞,活性率为 95%.培养 2～ 3 d,细胞贴壁、变形,呈多角形; 8 d左右,细胞融合成层.透射电镜观察显示细胞核圆形,有丰富的粗面内质网、高尔基体及分泌的基质成分.甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色阳性.细胞传至 5代后,出现"成纤维细胞样".[结论]本研究建立了简单易行的软骨细胞分离、培养方法;初代、第 2代细胞生长良好,适合于实验研究;软骨细胞 5代培养后,细胞表型发生改变.
关键词： 关节 软骨/细胞学 细胞培养 软骨细胞 /超微结构
