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肿瘤坏死因子α对体外培养视神经星形胶质细胞的促增殖作用
目的:观察肿瘤坏死因子α对体外培养的视神经星形胶质细胞的促增殖作用,为进一步分析星形胶质细胞的功能奠定实验基础.方法:实验于2005-06/10在贵阳中医学院第二附属医院眼科和贵阳医学院解剖学教研室完成.将出生24 h以内的新生小鼠断颈处死后,采用机械法分离视神经管内段的视神经,进行视神经星形胶质细胞的原代和传代培养及纯化,倒置相差显微镜观察培养细胞的生长过程和形态学变化.取第3,5,6代以后的细胞接种于24孔培养板中,贴壁后取出分别进行免疫荧光化学染色和免疫细胞化学染色,检测细胞胶质纤维酸性蛋白及S-100阳性产物情况.在第6代培养细胞中添加肿瘤坏死因子α,四唑盐比色法观察肿瘤坏死因子α对胶质细胞增殖的影响.结果:①原代及传代培养的细胞形态光学倒置相差显微镜观察结果:经机械分离培养的原代细胞24 h开始贴壁,贴壁细胞形态以梭形、不规则形为主.经消化传代去除悬浮的死亡细胞,培养至第4代以后细胞形态基本一致,细胞体积大,呈星形、梭形及不规则形,突起少,核相对较大,贴壁细胞呈片状生长.②培养的视神经星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白及S-100阳性产物免疫组织化学检测结果:免疫荧光染色及免疫细胞化学染色显示,胶质纤维酸性蛋白及S-100呈阳性,髓磷脂碱性蛋白免疫细胞化学染色阳性率小于1%,未加一抗的呈阴性.第6代以后细胞阳性率达97%以上.③细胞增殖活性四唑盐比色法检测结果:随着肿瘤坏死因子α的浓度加大,胶质细胞表现出增殖亢进现象,以30μg/L表现为显著,亢进效果明显强于未添加肿瘤坏死因子α的培养细胞(0.197±0.002,0.276±0.005,P＜0.001).结论:机械分离纯化新生小鼠视神经星形胶质细胞纯度高,肿瘤坏死因子α能够促进星形胶质细胞增殖,且呈现出明显的剂量依赖性效应,可在短期内获取大量的细胞,是进一步分析神经胶质细胞结构和功能的可靠材料.
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老龄鼠海马星形胶质细胞IL-1β持续表达桥接急性和慢性神经炎症反应
目的 观察急性神经炎症反应向慢性神经炎症反应转变中IL-1β持续表达的细胞来源,为阻断神经炎症反应的靶向治疗提供依据.方法 老龄鼠单次腹腔注射LPS(2 mg/kg,LPS组)或0.9％生理盐水(对照组).ELISA和RT-PCR测定海马区IL-1β及其基因表达.组织免疫荧光双标定位海马区IL-1β的细胞来源.结果 老龄鼠海马区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和离子钙接头蛋白抗原(IBA-1)阳性细胞在LPS治疗后1d增加(P＜0.05),30 d逐渐恢复到正常状态.这些变化与海马区IL-1 β mRNA及星形胶质细胞源IL-1β表达升高一致.LPS注射后任何时间点均未观察到IL-1β在小胶质细胞及神经元内表达.结论 LPS诱导胶质细胞延迟激活及星形胶质细胞源性IL-1[β持续表达,后者可能在急性神经炎症反应向慢性神经炎症反应转变中扮演了重要角色.
