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骨髓间充质干细胞诱导胆管内皮细胞与电纺纳米纤维的生物相容性
背景：胆管损伤修复是腹部外科手术的难题，组织工程胆管是解决这一难题的理想方法，而构建性能优异的组织工程胆管支架是这一研究的关键。目的：观察猪骨髓间充质干细胞诱导分化的胆管内皮细胞与电纺纳米纤维的生物相容性。方法：将猪骨髓间充质干细胞于体外定向分化为肝干细胞，再进一步分化为胆管内皮细胞，并通过形态学及RT-PCR对分化完成的细胞加以鉴定。用静电纺丝方法制备聚乳酸-羟基乙酸纳米纤维膜，通过扫描电镜观察其形态，并测定其短期(2周)内体外降解率。将分化的胆管内皮细胞与纳米纤维复合培养，观察细胞在纳米纤维表面的黏附、增殖能力，荧光染色观察细胞形态及在材料表面的分布情况，扫描电镜观察细胞在纳米纤维表面生长形貌。结果与结论：骨髓间充质干细胞体外定向分化4周后，细胞呈现典型树枝状胆管内皮细胞形态学改变，并且有CK19的表达。扫描电镜照片显示电纺材料为连续的纳米纤维，纤维直径均分布在200-500 nm范围内，在2周内聚乳酸-羟基乙酸纳米纤维没有发生明显的降解。通过细胞黏附率计算、MTT 法检测、荧光染色及扫描电镜观察证明猪骨髓间充质干细胞诱导分化后的胆管内皮细胞与聚乳酸-羟基乙酸纳米纤维具有良好的生物相容性。
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大黄灵仙胶囊调节胆管内皮细胞TGF-β1mRNA、Smad2/3mRNA表达的实验研究
目的 明确大黄灵仙胶囊对胆管内皮细胞TGF-β1 mRNA、Smad2/3 mRNA表达的调节作用,阐明其是否能够逆转胆管内皮细胞纤维化进程,从而发挥临床疗效.方法 体外培养人原代胆管内皮细胞株,以适当LPS给予刺激,采用大黄灵仙胶囊含药血清进行干预,细胞实验分为空白组、模型对照组、大黄灵仙胶囊大剂量组和小剂量组,在干预后24h、48h、72h提取细胞总RNA,采用荧光PCR技术,测定TGF-β1mRNA和Smad2/3 mRNA表达情况.结果 大黄灵仙胶囊能降低TGF-β1mRNA表达水平,在含药血清干预处理后48h、72h与模型对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),且成剂量依赖性,同样在干预后48h、72h细胞内Smad2/3 mRNA表达明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 大黄灵仙胶囊对TGF-β1-Smad2/3信号转导通路具有显著的下调作用,其能缓解早期肝内胆管纤维化进程,达到防治肝内胆管结石形成的临床效果.
