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乙腈、乙醇、色谱柱去除血清高丰度蛋白方法的比较
目的 比较乙腈沉淀法、乙醇沉淀法和多重亲和去除色谱柱Human 14法去除人血清中高丰度蛋白的效果.方法 应用乙腈沉淀法、乙醇沉淀法和多重亲和去除色谱柱Human 14法对血清样品进行处理,Bis-Tris Mini Gels电泳和双向凝胶电泳检测去除高丰度蛋白的效果.结果 从一维胶电泳图灰度值分析,血清经过乙腈法、色谱柱法、乙醇法处理后,白蛋白条带灰度值由原血清的19分别变成157.2,40.8和8.2；从2-DE电泳图分析看出,多重亲和去除色谱柱Human 14法处理后的蛋白点数显著增多,比原血清增加了137个；乙腈法和乙醇法处理后虽然蛋白点减少了,却有低丰度蛋白质点显现出来.结论 乙腈沉淀法能在去除血清中高丰度蛋白的同时收获更多的10kD以下的小分子量蛋白；乙醇沉淀法虽然能去除部分高丰度蛋白,但小分子量蛋白的收获量较少；而多重亲和去除色谱柱Human 14法不仅能有效地去除血清中高丰度蛋白的干扰,且保留了大量的小分子量蛋白.
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固相配体文库降低血清高低丰度蛋白浓度差异
目的 探讨固相配体文库技术富集血清低丰度蛋白及提高质谱鉴定低丰度蛋白敏感性.方法 3组混合血清标本采用蛋白富集珠(ProteoMiner)处理,一维或二维电泳图谱分析比较处理前后血清图谱中的差异条带或蛋白质斑点,并于处理后血清的二维电泳图谱中显著增加的蛋白质斑点进行高效液相色谱法电喷雾串联质谱鉴定.结果 一维及二维电泳图谱表明,固相配体文库技术能显示更多的蛋白条带或蛋白质斑点;显著富集的蛋白质点进行质谱鉴定结果表明,固相配体文库技术能够提高血清低丰度蛋白质谱鉴定,如簇集蛋白、玻连蛋白、C4b结合蛋白α链、补体C4-A等.结论 固相配体文库技术能有效地富集血清中低丰度蛋白,同时稀释高丰度蛋白,表明该技术有助于血清中低丰度蛋白的分离、富集与鉴定.
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脑脊液蛋白质组学高丰度蛋白去除方法的建立与评价
目的 建立和评价脑脊液蛋白质组学中高丰度蛋白的去除方法.方法 使用Oasis HLB(hydrophilic-lipophilic balance)过滤柱,运用反相固相法,根据蛋白质不同的疏水性分馏脑脊液,去除高丰度蛋白和盐.将含有低丰度蛋白的过滤液冻干,利用双向凝胶电泳(2-DE)分析评价脑脊液蛋白层析去除高丰度蛋白的效果.结果 通过Oasis HLB柱处理可将大部分高丰度蛋白去除.2-DE图谱中低丰度蛋白质分辨率明显增加,点数增多59.86%.结论 本研究建立的脑脊液高丰度蛋白去除方法可有效地应用于疾病的脑脊液蛋白质组学研究.
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切胶免疫制备腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体
目的 通过切胶免疫制备人腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体,为下一步腮腺液高丰度蛋白单克隆抗体制备提供抗原解决方案.方法 将腮腺液经超滤法浓缩蛋白后,进行SDS-PAGE分析,切取分子量约为50-65kDa的高丰度蛋白条带,研磨后注射新西兰大耳白兔诱导产生免疫应答并制备兔抗人腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体,并应用蛋白免疫印记(Western blot)等方法进行抗体鉴定.结果 成功制备和鉴定了人腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体.结论 成功制备和鉴定了人腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体,为下一步腮腺液高丰度蛋白单克隆抗体制备及唾液蛋白质组学研究奠定基础.
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利用免疫亲和层析技术去除母乳中高丰度蛋白的研究
目的 建立并评价一种去除母乳中高丰度蛋白的方法,使低丰度蛋白得到富集,为通过蛋白质组学技术发现母乳中的重要活性蛋白奠定基础.方法 将母乳作为混合蛋白抗原免疫动物制备多克隆抗体,随后用此多克隆抗体通过免疫亲和层析技术去除母乳中的高丰度蛋白,采用免疫印迹法对免疫亲和层析的效果进行验证.结果 母乳中的4种高丰度蛋白均得到一定程度的去除,建立了去除母乳中高丰度蛋白的新方法.结论通过混合抗原所制备的多克隆抗体可有效去除其中的高丰度抗原,并可使低丰度蛋白得到富集.这一方法也可用于提高血浆等样品中低丰度蛋白的检出效率.
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血清蛋白质组学研究中高丰度蛋白去除方法的建立
目的 建立血清蛋白质组学研究中高丰度蛋白的去除方法并评价其去除效果.方法 应用Sigma公司2006年新推出的血清白蛋白和IgG去除试剂盒(ProteoPrep Immunoaffinity Albumin and IgG Depletion Kit)去除血清中高丰度的白蛋白和IgG等,再用双向凝胶电泳(2-DE)分析去除的效果.结果 本实验建立的血清中高丰度蛋白的去除方法,约95%的白蛋白和IgG能够被去除,2-DE图谱中蛋白质点更加清楚,部分低丰度蛋白得以显现.结论 成功建立血清中高丰度蛋白的去除方法.可为今后的血清蛋白质组学研究奠定基础.
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去除高丰度蛋白质对脑脊液差异蛋白鉴定的影响
目的 探讨去除高丰度蛋白质对脑脊液差异蛋白鉴定的影响.方法 应用Cibacron-blue-3G-A亲和层析柱去除脑脊液中含量多的高丰度蛋白质-白蛋白,然后对去除白蛋白前后的脑脊液样本,以及经过Cibacron-blue-3G-A亲和层析柱吸附后洗脱下来的脑脊液样本,分别进行双向凝胶电泳,对比分析各样本差异蛋白点的分布情况.结果 Cibacron-blue-3G-A亲和层析柱通过结合去除了脑脊液中的大部分白蛋白,但是同时也去除了一些其它可能有意义的蛋白质,而且在去除白蛋白后,一些在白蛋白存在时丰度显现并不是很高的蛋白质丰度相对增加,同样干扰了周边低丰度蛋白的检出.结论 亲和层析柱无法特异性去除脑脊液中的高丰度蛋白质,丢失的蛋白信息可能影响后续疾病相关差异蛋白的鉴定.
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血清蛋白质组学研究中高丰度蛋白的去除
目的 建立血清蛋白质组学研究中高丰度蛋白的去除方法并观察其去除效果.方法 应用Agilent公司去除人14种高丰度蛋白的多重亲和排除系统(Human 14 Multiple Affinity RemovalSystem),去除血清中自蛋白、IgG和抗胰蛋白酶等14种高丰度蛋白,并用SDS-PAGE评价去除的效果.结果 建立血清中高丰度蛋白的去除方法,可去除白蛋白等14种高丰度蛋白.SDS-PAGE图谱中去除高丰度蛋白后条带更清晰,部分低丰度蛋白得以显现.结论 成功建立血清中高丰度蛋白的去除方法,可为下游的蛋白质组学技术奠定基础.
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两种去除血清高丰度蛋白方法的比较
目的 比较乙腈沉淀法和MERCK公司的血清白蛋白和IgG去除试剂盒去除人血清中高丰度蛋白的效果.方法 应用乙腈沉淀法和MERCK公司的血清白蛋白和IgG去除试剂盒对血清样品进行处理,Tricine-SDS-PAGE电泳和SELDI-TOF-MS检测去除高丰度蛋白的效果.结果 乙腈沉淀法能在去除血清高中丰度蛋白的同时收获更多的10 kD以下的小分子量蛋白,MERCK公司的试剂盒也能有效地去除血清高中丰度蛋白,特异性较好.结论 2种方法均能去除血清中高丰度蛋白,需根据研究目的选择适合的方法.
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两种方法去除肺癌患者血清高丰度蛋白的研究
目的:去除肺癌血清中的高丰度蛋白,为寻找肺癌早期肿瘤标志物奠定基础.方法:血清经除脂后按血清∶水∶乙腈=1∶2∶4.5(v/v/v)沉淀分离高丰度蛋白,用SDS-PAGE验证去除效果.试剂盒去除血清高丰度蛋白,对体检健康者和非小细胞肺癌患者去除高丰度蛋白前后的血清凝胶电泳图像进行分析.结果:经本法去除后血清蛋白含量呈显著降低.与等量上样原血清电泳结果相比,相对分子量在50-80kD间的蛋白质被明显去除,而被其掩盖的相对分子质量在10kD以下的低丰度蛋白质得以显现.结论:乙腈沉淀法提供了一种经济、简便、重复性较好的人血清高丰度蛋白去除方法,为进一步寻找肺癌早期肿瘤标志物奠定了基础并提供了技术支持.
