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桑皮素对人前列腺癌Du145细胞的抑制作用
目的:为探讨桑皮素对Du145细胞的增殖抑制及其诱导凋亡的影响.方法:用5、10和15μmol/L的桑皮素作用于Du145细胞24 h后, 在倒置显微镜及透射电镜下观察细胞形态学变化;利用CCK-8法来检测桑皮素对Du145细胞的增殖的影响;应用流式细胞术和DNA fragmentation实验检测Du145细胞的凋亡情况;采用Western blot技术检测Gli1和VEGF蛋白的表达变化.结果:发现桑皮素能够抑制Du145细胞的生长, 并诱导Du145细胞发生凋亡甚至死亡, 作用24h后IC50=16.5μmol/L;与对照组相比, 细胞凋亡率显著升高, 当作用浓度≥15μmol/L后细胞晚期凋亡明显增多;随着桑皮素作用浓度的增加, Gli1和VEGF蛋白表达量明显下降.结论:桑皮素诱导Du145细胞的凋亡, 并降低了Hh信号通路中Gli1和VEGF因子的表达.
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应用CRISPR/cas9系统敲除HIF1α基因抑制前列腺癌DU145细胞的增殖和侵袭
目的 应用新型基因编辑工具CRISPR/cas9 (clustered regularly interspaced palindromic repeat/CRISPR-associated system 9)在前列腺癌DU145细胞中部分敲除HIF1α基因,以探讨转录因子HIF1 α(hypoxia-inducible factor-1α)的功能及其对前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响.方法 以HIF1α-exon 1为靶点,设计两条sgRNA序列,构建CRISPR/cas9系统,在前列腺癌DU145细胞中敲除HIF1α基因,并利用CCK8、Transwell实验分析部分敲除HIF1α对前列腺癌DU145细胞增殖、迁移、侵袭的影响.结果 酶切及测序结果显示HIF1α部分敲除成功.部分敲除HIF1α基因后,其表达水平明显下调,可显著抑制DU145细胞增殖、迁移、侵袭.结论 成功构建了HIF1α CRISPR/cas9基因敲除系统,可显著抑制前列腺癌DU145细胞增殖、迁移、侵袭能力.该系统可为深入研究HIF1α基因的功能提供新的工具.
关键词： CRISPR/Cas9 HIF1α基因 前列腺癌 Du145细胞 -
环王巴明诱导DU145细胞凋亡的机制研究
目的:研究环王巴明诱导DU145细胞凋亡作用及其对Gli-1和Bcl-2 mRNA表达的影响,探讨环王巴明诱导DU145细胞凋亡的机制.方法:不同浓度环王巴明处理DU145细胞后,吖啶橙染色,荧光显微镜下观察细胞形态变化.流式细胞术观察细胞凋亡率变化,RT-PCR检测5、10μmol/L环王巴明作用72h后的实验组和对照组Gli-1、Bcl-2 mRNA表达水平差异.结果:当环王巴明浓度大于5μmol/L作用72h后,荧光显微镜下可见细胞核固缩或碎裂,核仁变形等典型的凋亡形态学改变.环王巴明5μmol/L组Gli-1、Bcl-2mRNA表达减弱,但同对照组差异无统计学意义(P>0.05),与空白及DMSO对照组相比10μmol/L环王巴明可以显著下调Gli-1、Bcl-2 mRNA表达(P<0.01).结论:环王巴明可诱导人前列腺癌DU145细胞株凋亡,其作用机制可能与下调Gli-1和Bcl-2mRNA表达,活化细胞凋亡的线粒体途径有关.
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硼替佐米对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的：通过硼替佐米作用于前列腺癌细胞体外增殖及凋亡的实验研究，初步探讨硼替佐米治疗前列腺癌的机制。方法体外培养DU145细胞，使用不同浓度硼替佐米分别作用于DU145细胞24、48、72 h，CCK-8法检测肿瘤细胞的增殖，Annexin-V/PI法检测细胞凋亡率。流式细胞术检测DR5、Fas蛋白的表达。结果硼替佐米作用后，随剂量增加，DU145细胞存活率逐渐下降，凋亡细胞逐渐增多，与对照组相比，至药物浓度为15 nmol/L 时有显著差异（P<0.05），同时硼替佐米处理细胞后，DR5、Fas蛋白的表达明显增加（P<0.05）。结论硼替佐米能够有效抑制前列腺癌细胞增殖并促进其凋亡，且这种作用可能与增加 DR5、Fas蛋白的表达有关。
