首页 > 文献资料
-
环王巴明抑制sonic hedgehog信号通路对氧糖剥夺/再复氧损伤大鼠皮质神经干细胞增殖的影响
目的 探讨环王巴明预处理抑制sonic hedgehog信号通路对体外氧糖剥夺/再复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤大鼠大脑皮质神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响.方法 新生SD大鼠大脑皮质神经干细胞采用悬浮培养法分离纯化.第3代神经干细胞贴壁培养后氧糖剥夺150 min,复氧培养24 h.实验分为正常组、模型组及环王巴明预处理组.细胞鉴定采用免疫荧光法,细胞活力采用CCK-8法检测,细胞增殖采用BrdU法及流式细胞周期检测,Ptc-1、Smo、Gli-1蛋白表达采用Western blot检测.结果 悬浮及贴壁培养细胞均高表达巢蛋白.模型组及环王巴明组细胞活力较正常组显著降低.其中,环王巴明组降低更明显(P＜0.05).模型组细胞增殖明显,Ptc-1、Smo、Gli-1蛋白表达上调,而环王巴明组细胞增殖较模型组低,Ptc-1、Smo、Gli-1蛋白表达下调(P＜0.05).结论 环王巴明预处理能抑制体外氧糖剥夺/再复氧损伤后神经干细胞的增殖,提示Shh信号可能参与损伤后神经干细胞增殖的调控.
-
环王巴明通过调节bcl-2的表达影响Du145细胞的凋亡
目的 研究环王巴明诱导Du145细胞凋亡作用,并探其机制.方法 不同浓度环王巴明处理细胞,透射电镜下观察细胞超微结构变化.同时行DAPI染色后荧光显微镜下观察细胞核形态变化;应用western blot 方法 检测Bc1-2蛋白水平变化.结果 10μmol/L环王巴明作用72h后,DAPI染色后荧光显微镜下见Du145细胞核内有致密的颗粒荧光,固缩或片段化的细胞核.透射电镜下可见细胞核固缩,染色质边集,细胞膜微绒毛减少等典型的凋亡形态学改变.而对照组的细胞形态正常,细胞膜表面可见许多微绒毛.10 μmol/L组Du145细胞Bcl-2蛋白表达显著降低,与空白对照组及DMSO组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 环王巴明通过调节bcl-2蛋白的表达,从而影响Du145细胞的凋亡.
-
环王巴明加剧大鼠脑缺血再灌注损伤
目的 探讨环王巴明(Cyc)对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响.方法 60只SD雄性大鼠随机分成假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注对照组(Con组)和脑缺血再灌注Cyc干预组(Cyc组),每组20只.于脑缺血再灌注后3h腹腔注射Cyc(10 mg/kg)或无水乙醇,连用7d.采用Longa评分法行脑缺血后1d和14d神经功能缺损评分.脑缺血24 h时,干湿质量法检测脑含水量,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测脑梗死体积,H-E染色观察病理改变,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡.免疫化学法检测缺血后24 h NeuN、caspase-3蛋白及14 d时胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达.结果 Cyc和Con组大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、脑梗死体积、TUNEL阳性细胞计数、caspase-3和GFAP蛋白表达均高于假手术组(P＜0.05),且Cyc组较Con组更高(P＜0.05).Cyc和Con组NeuN蛋白表达低于假手术组(P＜0.05),且Cyc组较Con组更低(P＜0.05).组织病理见Cyc组细胞和间质水肿、神经细胞变形、核固缩、细胞坏死等重于Con组.结论 Cyc可加剧大鼠脑缺血再灌注损伤.
-
魟鱼骨素联合环王巴明对人乳腺癌细胞系MCF-7的作用
目的 探讨魟鱼骨素和环王巴明对人乳腺癌细胞系MCF-7是否具有协同作用,二者是否存在佳配伍比例,以及解释该现象可能存在的分子生物学机制.方法 分别将魟鱼骨素与环王巴明配制成10μmol/L浓度,按体积比1:4、2:3、1:1、3:2、4:1进行配伍；采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测各配伍组MCF-7细胞增殖情况；流式细胞术(FCM)检测各组药物作用前后细胞周期的变化及凋亡率；Western-blotting法检测细胞周期蛋白cyclin D1及P21蛋白表达的变化.结果 MTT提示1:1配伍组对细胞增殖抑制作用明显优于其他药物组(P＜0.05),差异具有统计学意义；FCM法提示1:1配伍组作用细胞24h与单个用药作用48h所得结果差异无统计学意义(P ＞0.05)；Western-blotting提示1:1配伍纽作用细胞24 h与单个用药作用48h细胞周期蛋白cyclin D1与P21灰度值差异无统计学意义(P＞0.05).结论 魟鱼骨素和环王巴明存在协同作用及佳药物配伍比例(两药浓度分别为10μmol/L,两药按体积比1:1配伍),24h可达到佳作用效果,其分子生物学机制与cyclin D1失表达、P21过表达有关.
-
环王巴明对人乳腺癌细胞系MCF-7的作用
目的 探讨环王巴明对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖的影响及其分子生物学机制.方法 以不同浓度的环王巴明处理MCF-7细胞不同时间,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)分析法、流式细胞术及Western blot检测.结果 环王巴明对MCF-7细胞增殖的抑制呈浓度和时间依赖性(P＜0.05).随着药物作用时间延长,G0/G1期细胞的百分比明显增加而S期细胞的百分比明显减少(P＜0.05)；并且细胞凋亡率也随着药物作用时间的延长而增加(P＜0.05).MCF-7细胞周期素D1的表达逐渐降低而p21表达逐渐增高(P＜0.05).结论 环王巴明抑制MCF-7细胞的增殖,阻滞细胞从G1期向S期转化,其机制可能与调控Hedgehog(Hh)信号通路的相关细胞周期蛋白表达有关.
-
抑制Hedgehog信号通路对食管癌细胞EC9706增殖及凋亡的影响
目的 研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环王巴明对食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响.方法 体外培养食管癌EC9706细胞,以10、50、100 μmol/Lol/L的环王巴明作用24 h,MTT法检测环王巴明对EC9706细胞增殖的影响,流式细胞技术检测环王巴明对EC9706细胞凋亡的影响,RT-PCR检测环王巴明对EC9706细胞Gli-1 mRNA表达的变化,Western blot检测环王巴明对EC9706细胞Gli-1蛋白表达的变化.结果 MTI检测结果表明10 μmol/Lol/L环王巴明组(86.11±2.61)％、50 μmol/Lol/L环王巴明组(77.81±3.13)％和100μmol/Lol/L环王巴明组(70.20±4.11)％细胞活性较空白对照组(99.97±0.21)％降低(P＜0.05);流氏细胞技术检测结果表明10 μmol/Lol/L环王巴明组(16.22±0.21)％、50 μmol/Lol/L环王巴明组(25.87±0.24)％和100 μmol/Lol/L环王巴明组(32.36±0.26)％细胞总凋亡率较空白对照组(2.76±0.28)％升高(P＜0.05);RT-PCR检测结果表明10 μmol/Lol/L环王巴明组(0.78±0.06)％、50μmol/Lol/L环王巴明组(0.58±0.06)％和100μmol/Lol/L环王巴明组(0.40±0.06)％Gli-1 mRNA表达水平较空白对照组(0.93±0.11)％降低(P＜0.05);Western blot检测结果表明10 μmol/Lol/L环王巴明组(0.68±0.06)％、50 μmol/Lol/L环王巴明组(0.48±0.05)％和100 μmol/L环王巴明组(0.30±0.04)％ Gli-1蛋白表达水平较空白对照组(0.75±0.11)％降低(P＜0.05).结论 Hedgehog信号通路阻断剂环王巴明可以抑制食管癌EC9706细胞增殖、诱导U87细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLi-1表达有关.
-
抑制Hedgehog信号通路对脑胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响
目的 研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环王巴明对脑胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响.方法 体外培养U87细胞,以10、50、100 μmol/L的环王巴明作用24h,MTT法检测环王巴明对U87细胞增殖的影响,流式细胞技术检测环王巴明对U87细胞凋亡的影响,RT-PCR检测环王巴明对U87细胞Gli-1 mRNA表达的变化,Western blot检测环王巴明对U87细胞Gli-1蛋白表达的变化.结果 MTT检测结果表明10μmol/L环王巴明组(85.11±2.61)％、50μmol/L环王巴明组(76.81±3.13)％和100μmol/L环王巴明组(69.20±4.11)％细胞活性较空白对照组(99.87±0.21)％降低(P＜0.05);流氏细胞技术检测结果表明10μmol/L环王巴明组(15.22±0.21)％、50μmol/L环王巴明组(24.87±0.24)％和100μmol/L环王巴明组(31.36±0.26)％细胞总凋亡率较空白对照组(2.66±0.28)％升高(P＜ 0.05);RT-PCR检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.68±0.06)％、50μmol/L环王巴明组(0.48±0.06)％和100μmol/L环王巴明组(0.30±0.06)％Gli-1 mRNA表达水平较空白对照组(0.92±0.11)％降低(P＜ 0.05);Western blot检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.78±0.06)％、50μmol/L环王巴明组(0.58±0.05)％和100μmol/L环王巴明组(0.40±0.04)％Gli-1蛋白表达水平较空白对照组(0.94±0.11)％降低(P＜0.05).结论 Hedgehog信号通路阻断剂环王巴明可以抑制脑胶质瘤U87细胞增殖、诱导U87细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLi-1表达有关.
-
抑制Hedgehog信号通路对前列腺癌DU125细胞增殖及凋亡的影响
目的 研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环王巴明对前列腺癌Du145细胞增殖及凋亡的影响.方法 体外培养DU145细胞,以10、50、100 μmol/L的环王巴明作用24 h,MTT法检测环王巴明对DU145细胞增殖的影响,流式细胞技术检测环王巴明对DU 145细胞凋亡的影响,RT-PCR检测环王巴明对DU145细胞Gli-1 mRNA表达的变化,Westernblot检测环王巴明对DU145细胞Gli-1蛋白表达的变化.结果 MTT检测结果表明10 μmol/L环王巴明组(85.01±2.61)％、50μmol/L环王巴明组(76.71±3.13)％和100 μmol/L环王巴明组(69.10±4.11)％细胞活性较空白对照组(99.97±0.21)％降低(P＜0.05);流氏细胞技术检测结果表明10 μmol/L环王巴明组(15.12±0.21)％、50μmol/L环王巴明组(24.97±0.24)％和100 μmol/L环王巴明组(31.26±0.26)％细胞总凋亡率较空白对照组(2.56±0.28)％升高(P＜0.05);RT-PCR检测结果表明10 μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)％、50 μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)％和100 μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)％Gli-1mRNA表达水平较空白对照组(0.92±0.11)％降低(P＜0.05);Western blot检测结果表明10 μmol/L环王巴明组(0.79±0.06)％、50 μmol/L环王巴明组(0.59±0.05)％和100 μmol/L环王巴明组(0.41±0.04)％ Gli-1蛋白表达水平较空白对照组(0.94±0.11)％降低(P＜0.05).结论 Hedgehog信号通路阻断剂环王巴明可以抑制DU145细胞增殖、诱导DU145细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLi-1表达有关.
-
环王巴明诱导DU145细胞凋亡的机制研究
目的:研究环王巴明诱导DU145细胞凋亡作用及其对Gli-1和Bcl-2 mRNA表达的影响,探讨环王巴明诱导DU145细胞凋亡的机制.方法:不同浓度环王巴明处理DU145细胞后,吖啶橙染色,荧光显微镜下观察细胞形态变化.流式细胞术观察细胞凋亡率变化,RT-PCR检测5、10μmol/L环王巴明作用72h后的实验组和对照组Gli-1、Bcl-2 mRNA表达水平差异.结果:当环王巴明浓度大于5μmol/L作用72h后,荧光显微镜下可见细胞核固缩或碎裂,核仁变形等典型的凋亡形态学改变.环王巴明5μmol/L组Gli-1、Bcl-2mRNA表达减弱,但同对照组差异无统计学意义(P>0.05),与空白及DMSO对照组相比10μmol/L环王巴明可以显著下调Gli-1、Bcl-2 mRNA表达(P<0.01).结论:环王巴明可诱导人前列腺癌DU145细胞株凋亡,其作用机制可能与下调Gli-1和Bcl-2mRNA表达,活化细胞凋亡的线粒体途径有关.
