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复方接骨中药对骨髓间充质干细胞体外增殖及向成骨细胞分化的影响
目的:分析复方接骨中药对体外培养的骨髓间充质干细胞增殖、分化的影响.方法:实验于2003-12/2005-02在解放军第二五二医院完成.①取体质量(250±10)g的雄性SD大鼠60只,随机分为实验组和对照组,每组30只.②复方接骨中药(厚朴10 g,大黄10 g,枳壳10 g,桃仁10 g,苏木10 g,当归10 g,红花5 g,骨碎补15 g,川断15 g,熟地15 g,自然铜10 g,龟板10 g,枸杞15 9,杜仲15 g)按体表面积折算为SD大鼠的等效剂量后,按中医传统方法煎制,灌喂量2.5 mL/(只·d).于晨8:00灌喂实验组大鼠.在同样的条件下用等量浓缩自来水灌喂对照组.两组均连续灌喂10 d.末次灌喂前一天20:00大鼠禁食禁水,末次灌喂后2 h,取股动脉血制备出含药血清及对照血清.③取3个月龄雄性SD大鼠1只,在无菌条件下取股骨、胫骨骨髓,实验组骨髓细胞采用体积分数为0.1含药血清+DMEM培养.对照组骨髓细胞采用体积分数为0.1非含药血清+DMEM培养,传代3次后用于实验.每日于倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化,于培养第24,48,72,96,120小时用四唑盐法检测细胞的增殖情况(用吸光度表示),于培养1,2,3,4周末用碱性磷酸酶检测细胞分化情况. 结果:60只大鼠均进入结果分析.①两组细胞的生长曲线均呈"S"形,在72,96,120 h时实验组细胞均比对照组细胞增殖迅速(吸光度值分别为0.213±0.021,0.192±0.032;0.341±0.031,0.274±0.021;0.401±0.016,0.325±0.014,P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01).②两组细胞均是在第2周末时碱性磷酸酶活力达到高峰,第3周末开始下降.第2,3周末时实验组碱性磷酸酶活力显著大于对照组[(10.28±0.71),(7.41±0.53)nkat/L,P＜0.01;(8.81±0.76),(6.37±0.41)nkat/L,P＜0.05].③镜下观察实验组骨髓间充质干细胞大量诱导分化为成骨细胞,对照组成骨细胞数量、密度明显低于实验组.结论:复方接骨中药可以促进体外培养的骨髓间充质干细胞增殖及向成骨细胞方向分化.
