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益气健脾解毒方含药血清对奥沙利铂诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的影响
目的 探讨益气健脾解毒方含药血清对奥沙利铂诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及凋亡抑制基因(Survivin)、caspase-3及caspase-9表达的影响.方法 运用血清药理学方法制备大鼠益气健脾解毒方含药血清,将人肝癌HepG2细胞按随机数字表法分为中药组、化疗组、联合组和空白组,空白组加入10%空白血清;化疗组加入2μg奥沙利铂和10%空白血清;联合组加入2μg奥沙利铂和10%益气健脾解毒方含药血清;中药组加入10%益气健脾解毒方含药血清.采用MTT法检测细胞抑制率,采用Western blot法及RT-PCR法检测各组细胞Survivin、caspase-3、caspase-9蛋白及基因表达.结果 与空白组比较,中药组、化疗组及联合组人肝癌HepG2细胞抑制率明显增高(P<0.05).与化疗组及中药组比较,联合组Survivin[(0.151±0.054)比(0.288±0.089)、(0.375±0.063)]蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01),Survivin mRNA[(0.205±0.091)比(0.487±0.073)、(0.725±0.092)]表达下调(P<0.05或P<0.01);caspase-3[(0.821±0.079)比(0.634±0.098)、(0.487±0.102)]、caspase-9蛋白[(0.901±0.047)比(0.709±0.054)、(0.402±0.012)]表达上调(P<0.05或P<0.01),caspase-3 mRNA[(1.928±0.226)比(1.564±0.195)、(1.287±0.312)]、caspase-9 mRNA[(2.063±0.517)比(1.536±0.084)、(1.019±0.182)]表达均上调(P<0.05或P<0.01).结论 益气健脾解毒方对奥沙利铂诱导HepG2细胞凋亡机制可能通过增强抑制Survivin及促进Caspase-3及caspase-9蛋白表达发挥作用.
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阳和汤含药血清对乳腺癌MCF-7细胞iNOS、COX-2及NF-κB表达的影响
目的 观察阳和汤含药血清干预对乳腺癌MCF-7细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthasi,iNOS)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)及NF-κB的影响.方法 用不同药物剂量(4.5、9、18 g/kg)制备的含药血清分别干预MCF-7人乳腺癌细胞,分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组.在24、48、72、96 h采用Real-time RT PCR法检测iNOS、COX-2 mRNA表达,Western-blot检测NF-κB蛋白表达.结果 与空白组比较,干预24、48、72、96 h,低、中、高剂量组iNOS、COX-2 mRNA表达降低(P<0.05),NF-κB蛋白表达降低(P<0.05),且呈一定的浓度及时间依赖性,干预72 h后变化差异无统计学意义(P>0.05).结论 阳和汤可降低NF-κB蛋白及COX-2、iNOS mRNA表达水平.
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补肾方含药血清拮抗谷氨酸兴奋性神经毒作用及其机制的初步研究
目的:研究补肾复方含药血清(BS)对谷氨酸诱导凋亡PC12细胞的保护作用;并观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内钙信号转导机制的影响.方法:采用MTT法测定谷氨酸致损伤后PC12细胞的存活力;采用荧光显微镜技术观察BS对谷氨酸所诱导PC12细胞凋亡的影响;以流式细胞术观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内游离钙离子浓度的影响;运用蛋白免疫印迹(Western-blotting)技术观察BS对凋亡的PC12细胞CaMKⅡ的影响.结果:20%浓度BS含药血清可以拮抗谷氨酸的兴奋性神经毒作用,抑制PC12细胞凋亡;20%浓度BS含药血清能够拮抗谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内钙离子浓度的升高,抑制CaMKⅡ的磷酸化水平增高.结论:BS含药血清具有拮抗谷氨酸兴奋性神经毒的作用,其神经保护作用的机制可能与减轻钙超载,调控钙信号通路关键信号分子的磷酸化有关.
关键词： 补肾复方 细胞凋亡 细胞内钙 钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ 中药血清药理学 -
中药复方血清药理研究方法学探讨--Ⅳ
家兔灌胃桂枝汤,1日1次,连续3d给药以及1日2次,连续3d给药,末次给药后0.5～9h采血,分离血清,观察各含药血清对病毒致细胞病变作用的影响.结果:上述各方法制备的含药血清抗副流感病毒致CPE作用所表现出的有效时间点分别为:无明显有效时间点、4～5h、2h、5～7h、1～6h,1日2次给药3d及1日3次给药后采集的含药血清可引起培养细胞明显的退行性改变.
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中药血清药理学实验方法研究进展
中药血清药理学是研究和探索中药药效作用的一种体外实验方法,对成分复杂的中药及粗提物制剂的药理实验提供了正确性、真实性和可靠性的保证,引起了医药界人士的广泛关注.由于含药血清与机体内环境相一致,从而排除了体内各种因素对中药及其制剂有效成分的影响,其科学性、可行性使中药药理研究易于深入到细胞分子水平,可对成分不明或复方中药制剂进行药效学和药动学研究.目前血清药理研究的成果及水平呈直线上升的趋势,实验报道越来越多.血清药理学实验的步骤很多,在许多重要环节上如处理不当,可使实验结果表现出假阳性或假阴性,故近年来对血清药理实验方法进行了系统的研究,现总结如下.
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双黄连及其拆方抗呼吸道合胞病毒作用的药效学研究
目的:研究双黄连及其拆方抗呼吸道合胞病毒(RSV)作用的体外和血清药效学,评价其组方的合理性.方法:采用细胞培养技术、染料摄入法,检测双黄连及其拆方抗RSV的作用,改变给药方式,探讨双黄连及其拆方抗病毒的作用环节.同时,采用中药血清药理学研究方法,观察含双黄连及其拆方的大鼠血清对RSV的抑制作用.结果:双黄连复方具有明显抗RSV的作用,并优于各拆方;且复方及拆方的体外和血清药效学结果具有一定的相关性;双黄连作用机制可能为直接杀病毒或抑制病毒吸附或抑制病毒增殖作用.结论:双黄连组方合理,并具有多环节抗RSV的作用.
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补肾方含药血清促进PC12细胞增殖及其拮抗谷氨酸神经毒作用的研究
目的:运用中药血清药理学方法研究补肾复方含药血清(BS)促进体外培养的PC12细胞增殖及其拮抗谷氨酸兴奋性神经毒损伤的作用.方法:以MTT法观察BS对体外培养的PC12细胞活力的影响及其拮抗谷氨酸损伤的作用,采用流式细胞术观察BS对谷氨酸所诱导PC12细胞凋亡的影响.结果:BS含药血清可以增强PC12细胞活力,拮抗谷氨酸的兴奋性神经毒作用且在20%浓度时作用强,并且能够抑制谷氨酸诱导的PC12细胞早期凋亡.结论:补肾方BS可能具有神经保护作用.
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补肾方含药血清对谷氨酸诱导凋亡的 PC12细胞胞浆内游离钙浓度及钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ磷酸化的影响
目的:运用中药血清药理学方法,研究补肾复方含药血清(BS)对谷氨酸(Glu)诱导凋亡的PC12细胞胞浆内游离钙离子浓度([Ca2+]i)及钙信号转导通路下游的关键信号分子钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化的影响.方法:采用谷氨酸诱导PC12细胞造成凋亡模型,以荧光探针Fluo-3/AM对活细胞染色,结合流式细胞技术观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内[Ca2+]i的影响;采用Western-blotting技术观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞CaMKⅡ磷酸化的影响.结果:20%浓度BS含药血清能够拮抗谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内钙离子浓度的升高,抑制CaMKⅡ的磷酸化水平增高.结论:补肾中药神经保护作用的机制可能与减轻钙超载,调控钙信号通路关键信号分子的磷酸化有关.
关键词： 补肾复方 神经保护 细胞内钙 钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ 中药血清药理学 -
经乙醇处理后肝癌患者清肝化瘀方含药血清对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用
目的:观察肝癌患者清肝化瘀方含药血清经乙醇处理后对肝癌细胞增殖的抑制作用.方法:肝癌患者分别于服清肝化瘀方前、服药2周、4周、6周服药后2h静脉采血10 ml,分离血清.预处理(向血清内加入4倍量的乙醇混匀,3000r/min离心,取上清温水浴蒸发,除去乙醇).采用四唑盐比色法(简称MTT)比较经乙醇处理后含药血清对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用.结果:随着患者用药时间延长和培养时间延长,抑制率逐渐增强.未处理血清抑制率高可达36.2%,经乙醇处理血清抑制率高可达33.2%.结论:经处理后肝癌患者清肝化瘀方含药血清对肝癌细胞增殖有较强的抑制作用,但抑制率较未处理组弱.
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血清药理学研究进展
血清药理学是指将中药或中药复方经口给动物灌服一定时间后采集动物血液、分离血清,用含有药物成分的血清进行体外实验的一种半体内实验方法.血清药理学是日本学者H iroko Iwam a[1]在1984年第一届和汉医药学会上首次提出的.1988年,日本国东京都医院的·田代真一_[2]正式提出"血清药理学"的概念.血清药理学是一种研究方法和实验技术,是药理作用(效应)的体外在体研究方法,而不是一门学科.
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清肺口服液拮抗呼吸道合胞病毒感染的血清药理学研究
目的 评价清肺口服液抗呼吸道合胞病毒(RSV)的活性.方法 采用MTT法,以利巴韦林为对照组,观察清肺口服液及不同给药方式对RSV的拮抗作用.结果 清肺口服液具有明显抗RSV的作用,与利巴韦林比较差异无统计学意义;清肺口服液的作用机制可能为抑制病毒吸附或增殖.结论 清肺口服液可以通过不同环节拮抗RSV病毒,是治疗RSV感染的有效复方制剂.
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含药血清药理作用强度与体内给药的量效、时效关系研究
目的:考察含药血清药理作用强度与体内给药的量效、时效关系.方法:以中药有效组分配伍方剂双参通冠方不同灌胃剂量、药后不同取血时间所得的药物血清为受试药物;培养心肌细胞,进行缺氧复氧实验,复氧同时给予不同双参通冠方药物血清处理,实验结束后取培养上清检测LDH值,以LDH释放抑制率为指标,观察含药血清药理作用强度与体内给药的量效、时效关系.结果:体内给药量大所获得的药物血清其LDH释放抑制率并不一定高,二者之间无明显量效关系;药后不同时间取血所获得的药物血清对LDH释放的抑制率亦不相同,以药后90min所得药物血清药理效应佳.结论:体内给药量并非越大其药物血清药理效应越好,药后佳取血时间亦得自行摸索.
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双参通冠方药物血清抗缺氧复氧损伤心肌细胞Ca2+超载的机制研究
目的:探讨双参通冠方药物血清对培养心肌细胞缺氧复氧损伤Ca2+超载的影响及其机制.方法:培养心肌细胞,建立缺氧复氧损伤模型.运用血清药理学方法研究双参通冠方药物血清对缺氧复氧损伤心肌Ca2+超载的影响.荧光分光光度法测定心肌细胞胞浆[Ca2+]i,激光扫描共聚焦显微法观察高K+及Thapsigargin诱导的细胞内Ca2+变化.结果:正常心肌细胞[Ca2+]i值较低,缺氧复氧后显著增高,高K+及Thapsigargin可诱导细胞内Ca2+的快速增多,双参通冠方药物血清能降低缺氧复氧心肌细胞Ca2+升高,并能抑制高K+及Thapsigargin所致的细胞内Ca2+荧光升高.结论:缺氧复氧损伤、高K+及Thapsigargin均可导致心肌细胞Ca2+增高,双参通冠方药物血清可抗心肌细胞Ca2+超载,其机制可能与其抑制细胞外Ca2+内流和促进内Ca2+吸收有关.
关键词： 中药血清药理学 Ca2+ 激光扫描共聚焦显微法 -
血府逐瘀浓缩丸抗血小板活化的临床疗效与体外血清药理作用的相关性研究
目的:探讨血小板活化在不稳定性心绞痛(unstable angina pectoris, UA)和急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)中的意义以及血府逐瘀浓缩丸抗血小板活化的临床疗效与其体外血清药理作用的相关性.方法:采用流式细胞技术和特异性标记抗体,检测口服血府逐瘀浓缩丸前后UA患者全血血小板膜糖蛋白CD62P和CD41/45的表达,并以UA患者的含药血清与AMI模型大鼠的外周血体外共温育后,检测大鼠CD62P水平.结果:UA患者CD62P及CD41/45表达量增高,分别为(24.36±7.91)%和(29.51±12.21)%,经有效治疗后降至(19.57±7.22)%(与治疗前比较,P＜0.05)和(20.87±8.73)%;同时血小板粘附和聚集率增高.AMI大鼠CD62P为(39.73±12.36)%,与有效病例的含药血清作用后降至(30.41±10.36)%(与温育前比较,P＜0.05),而疗效不佳患者的药后血清干预作用则较差(P＞0.05).结论:UA患者和AMI大鼠的血小板活化增强.血府逐瘀浓缩丸含药血清药理与临床整体药效在抑制血小板活化作用上的一致性,反映出中药血清药理作用与临床整体药效的良好相关性.
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步长脑心通含药血清抗缺氧诱导的皮质神经元凋亡的实验研究
目的 运用中药血清药理学方法研究步长脑心通抗缺氧诱导的原代皮质神经元凋亡的作用.方法 培养出生24h内SD乳鼠大脑皮质神经元,第7天以不同浓度步长脑心通含药血清处理后制造缺氧模型,定性定量检测细胞凋亡:MTT法观察神经元活力;Hoechst33258染色分析细胞核形态的变化;琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂,进一步验证和检测细胞凋亡.结果 步长脑心通含药血清处理后缺氧神经元活力增加,缺氧所致神经元凋亡明显减少.结论 步长脑心通对缺氧引起的皮质神经元凋亡有抑制作用.
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诱导K562细胞向红系分化的中药血清药理学方法探讨
目的对K562细胞向红系分化的中药血清药理学方法进行探讨.方法以K562细胞为体外模型,采用联苯胺定性技术检测细 胞内血红蛋白,比较不同条件下的含药血清诱导K562细胞前后的阳性率;测量波长为414的A 值.结果 10%的含药血清培养诱导K562细胞向红系分化的作用 强;灭活血清对K562细胞向红系分化的诱导作用强于未灭活血清;大鼠qd连续7d和bid连续3 d,2种方法所得血清均以10%的浓度培养K562细胞,二者诱导其向红系分化的作用无明显差 异;临床等效剂量ig所得血清比2倍、4倍剂量要好.结论含药血清的制备和含药血清在体外的合理应用对实验结果有很大的影响.
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补肾方含药血清促进PC12细胞增殖及其拮抗谷氨酸神经毒作用的研究
目的运用中药血清药理学方法研究补肾复方含药血清(BS)促进体外培养的PC12细胞增殖及其拮抗谷氨酸兴奋性神经毒损伤的作用.方法以MTT法观察BS对体外培养的PC12细胞活力的影响及其拮抗谷氨酸损伤的作用,采用流式细胞仪观察BS对谷氨酸所诱导PC12细胞凋亡的影响.结果 BS含药血清可以增强PC12细胞活力,拮抗谷氨酸的兴奋性神经毒作用且在20%浓度时作用强,并且能够抑制谷氨酸诱导的PC12细胞早期凋亡.结论补肾方BS可能具有神经保护作用.
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含大青叶兔血清抗内毒素作用研究
目的观察含大青叶兔血清的体外直接抗内毒素作用.方法运用中药血清药理学方法和细菌内毒素定量检测技术,采用动态比色法测定细菌内毒素含量.结果标准曲线的线性范围为0.005～5.0EU@ml-1,回归方程:lgT=3.00801-0.03851lgC,r=-0.98199;以3.81g@kg-1@d-1的剂量ig后,1～3h含大青叶兔血清具有抗内毒素作用(n=6).结论动态比色法能定量测定含大青叶兔血清的抗内毒素作用强度,较凝胶法具有检测范围宽,灵敏度高,人为误差小,可操作性强等优点.
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现代仪器分析技术在中药血清药物化学中的应用
本文在查阅了大量文献的基础上,对现代仪器分析技术在中药血清药化学中的应用进行了介绍、分析和总结,为从中药血清药物化学研究方法中挖掘出更加有效的仪器分析手段提供文献依据和研究思路.液/气相色谱及液/气质联用技术在中药血清药物化学中广泛应用,一些血中移行成分得以分析鉴定出来.中药血清药物化学的发展需要先进的现代仪器分析技术的支持,同时需要与血清药理学及中药药代动力学等相结合进行血中移行成分的检测、跟踪和分离.
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六神丸含药血清制备的方法学研究
[目的]研究六神丸含药血清的制备,探讨六神丸血清药理学的实验方法.[方法]分不同的给药剂量、给药天数和不同的采血时间制备含药血清.用原子吸收法测定血砷含量;薄层色谱法定性检测六神丸含药血清中蟾酥成分.用四氮唑溴盐(MTT)法确定佳血清制备方案.[结果]血砷含量随着给药剂量、给药天数增加和采血时间的延长而升高;薄层色谱表明六神丸含药血清中有蟾酥成分.六神丸含药血清对人髓系白血病细胞株-60(HL-60)细胞的抑制率,随给药剂量、天数增加、采血时间的延长而升高,且随着含药血清的添加量而升高.[结论]中药血清药理学含药血清的制备应区分不同的中药,采用相应的方案.
关键词： 六神丸 人髓系白血病细胞株-60 中药血清药理学
