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常见食用肉中狐源性成分DNA检测试剂盒的研制与应用
目的 研制狐源性成分DNA提取和检测试剂盒.方法 对经典DNA提取方法进行改良,研制了狐源性成分DNA提取和检测试剂,开发了狐源性成分DNA检测试剂盒,并对试剂盒检测参数进行评价.应用该试剂盒对狐肉与42种市售食用肉制品混合样品进行检验.结果 狐肉DNA检测试剂盒反复冻融处理5、10和20次后依然有效,可于-20℃保存1年.狐肉与42种常见食用肉类混合样品均可检出狐源性成分,试剂盒特异性为100％;样品DNA低检测限为0.1 ng/.μL.结论 狐源性成分DNA检测试剂盒适用于常见食用肉中狐源性成分快速检测,且特异性好、灵敏度高、稳定性强.
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人参DNA检测试剂盒的研制与评价
目的 研制一种集人参DNA提取与聚合酶链式反应(PCR)鉴定于一体的快速DNA检测试剂盒.方法 对经典人参DNA提取及PCR鉴定方法进行改良,确定试剂盒的组成与反应条件,并评价其性能指标.用试剂盒对人参正品、伪品进行DNA提取和PCR扩增,紫外分光光度法测纯度,并对市售人参样品进行验证.结果 提取的DNA纯度为(1.73 ±0.13);正品人参PCR鉴定结果在150～200 bp处有单一明亮条带.试剂盒特异性为100％;批内、批间变异系数分别为2.38％和2.62％;样品DNA原液稀释200倍仍可检测;反复冻融20次对检测效果无影响,可于-20℃保存1年;10个市售样品中8个为正品,2个为伪品.结论 人参DNA检测试剂盒提取的核酸浓度与纯度满足鉴定需求,且特异性好、灵敏度高、稳定性强,适用于人参及其伪品的快速检测.
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川贝母DNA检测试剂盒的研制与评价
目的 研制川贝母DNA检测试剂盒,确定试剂盒组成及操作程序,建立一种简便、快速鉴定川贝母的分子生物学检验方法.方法 分别采用药典法(2010年版《中国药典》增补本)和试剂盒法提取川贝母基因组DNA,进行PCR反应和RFLP鉴定.结果 采用药典法提取出的川贝母基因组DNA的OD260/OD280值高为(1.57±0.05),而采用试剂盒法所提DNA的OD260/OD280值可达(1.73±0.10);两法PCR结果均在300 bp上方有单一明亮条带;RFLP鉴定图谱均在100 ～ 250 bp之间出现2条清晰条带.结论 试剂盒法较药典法更稳定,且核酸提取量及纯度都高于药典法,2种方法PCR及RFLP鉴定结果完全一致.川贝母DNA检测试剂盒特异性好、灵敏度高、稳定性强,适用于川贝母的快速检测.
关键词： 川贝母 DNA检测试剂盒 聚合酶链式反应 限制性片段长度多态性分析 鉴定图谱 -
鹿胎DNA检测试剂盒的研制与评价
目的 研制一种鹿胎DNA检测试剂盒,对试剂盒的特异性、稳定性、敏感性和重复性进行评价,并对市售鹿胎药材进行质量考察.方法 对经典鹿胎DNA提取及PCR鉴定方法进行改良,研制标准DNA检测试剂盒,用试剂盒对鹿胎正品、伪品进行DNA提取和PCR扩增,紫外分光光度法测纯度,对市售鹿胎样品进行验证.结果 鹿胎DNA检测试剂盒反复冻融处理20次后依然有效,可于-20℃保存1年;样品DNA原液稀释200倍仍可检测;22个鹿胎样品中15个为正品,7个为不合格品.试剂盒特异性为100％;批内、批间变异系数分别为2.32％和2.56％.结论 鹿胎DNA检测试剂盒的核酸提取量及纯度满足鉴定需求,且特异性好、灵敏度高、稳定性强,适用于鹿胎与伪品的快速检测.
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乌梢蛇DNA检测试剂盒的研制与应用
目的 研制乌梢蛇DNA提取和检测试剂,对试剂盒的特异性、稳定性和重复性进行评价,并对市售乌梢蛇药材进行质量检测,终开发乌梢蛇DNA检测试剂盒.方法 应用现代的DNA指纹技术,对2015年版《中国药典》乌梢蛇DNA检测方法进行了优化和改良,研制了乌梢蛇DNA提取和检测试剂,开发了乌梢蛇PCR检测试剂盒,并对试剂盒检测参数进行评价.应用该试剂盒对随机抽取北京、天津、长春和吉林4个城市的18个乌梢蛇样品,进行检测,同时与药典DNA方法进行比对试验.结果 乌梢蛇DNA检测试剂盒经反复冻融5、10和20次后依然有效.18个市售乌梢蛇样品中14个样品为正品,4个样品为伪品.多次试验特异性、稳定性和重复性结果完全相同.试剂盒法与药典法检测结果一致.且试剂盒法可在普通实验室内完成DNA检测任务.结论 乌梢蛇DNA检测试剂盒对乌梢蛇药材鉴别简单方便、准确有效.适用于乌梢蛇DNA的快速检测.
