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多抗原表位表达载体文献资料
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肺炎支原体双蛋白多抗原表位表达载体的构建
目的 构建肺炎支原体(Mp)双蛋白多特异抗原表位表达载体,提高重组蛋白抗原的敏感性.方法应用生物信息学方法筛选Mp P116粘附蛋白抗原表位序列,PCR点突变技术获取P116蛋白基因片段,与pMD-T载体重组,转入大肠埃希菌JM109,通过限制性酶切图谱和基因序列分析鉴定重组质粒.酶切回收P116基因片段与pGEX 6P-1-P1 DNA重组,转入大肠埃希菌JM109菌株.用Glutathione Sepharose 4B纯化重组蛋白,SDS-PAGE分析表达产物的相对分子量,用Mp免疫血清进行免疫印迹试验,鉴定重组蛋白的免疫原性.结果PCR点突变扩增Mp黏附蛋白P116的基因片段为597 bp,该基因片段与已知的基因库序列分析比较,除两个突变位点由UAG突变为UGG外,其余核苷酸序列同源性为100%.SDS-PAGE分析多表位重组蛋白相对分子质量(Mr)为77.8 kDa.免疫印迹结果显示,Mp兔多价血清能与纯化的78KDa的重组蛋白发生免疫反应.结论本研究成功构建了Mp双蛋白多表位的表达载体.该表达载体表达的重组蛋白具有Mp特异的免疫反应性.重组蛋白的敏感性有待进一步鉴定.
