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一株耐热嗜盐菌的分离及16S rRNA基因序列分析
目的 利用盐固体分离培养基,从西藏自治区澜沧江边康宁镇一个47℃的盐井样品中分离纯化到一株耐热嗜盐菌菌株YJ0232.方法 通过形态观察、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析,鉴定嗜盐菌菌株YJ0232分类学地位.结果 菌株YJ0232初步鉴定为中度嗜盐菌,属于盐单胞菌属(Halomonas sp.)菌株.其16S rRNA基因序列已被GenBank数据库收录,序列号为EU029645.结论 本研究对澜沧江高盐环境微生物资源进行了初步探索研究.可为今后研究同类极端环境中新的物种资源以及微生物多样性提供参考.
关键词： 耐热嗜盐菌 16S rRNA基因序列 盐单胞菌 -
盐单胞菌YH-I中MFS超家族转运蛋白基因的克隆、生物信息学分析及其功能初步验证
目的 克隆盐单胞菌YH-I的MFS转运蛋白基因,明确其基本的生物学信息,并对其蛋白功能进行分析.方法 提取盐单胞菌YH-I的总基因组DNA,应用Sau3A I进行部分酶切,胶回收4 000～10 000 bp片段,与pUC18载体连接.采用功能互补法将连接产物电转化至缺陷株大肠埃希菌EP432感受态细胞中,筛选MFS转运蛋白新基因,进行生物信息学分析.以其为模板,进行PCR扩增后,转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,筛选阳性单克隆,接种至LBK液体培养基(Na+含量控制在0～0.8 mol/L),IPTG诱导表达.结果 从盐单胞菌YH-I克隆出全长为4 219 bp的片段,经DNAMAN分析,此片段含有4个开放式阅读框(ORF),提交NCBI进行BLAST比对,其中长度为1 209 bp的ORF2与Halomonas campaniensis(WP_038484815.1)编码的MFS转运蛋白一致性为86％,编码402个氨基酸,预测的相对分子质量为43 000,等电点为9.63.经跨膜预测与疏水性分析,该蛋白定位于细胞膜上,含有12个疏水性跨膜区.经系统发育树分析,来自盐单胞菌YH-I的MFS转运蛋白处于1个独立的分支,可能为新型的MFS转运蛋白成员.经LBK转运能力分析,该蛋白不具有Na+转运能力.结论 本研究对克隆的MFS转运蛋白新基因进行的生物信息学分析及功能初步验证,为进一步明确盐单胞菌YH-I的MFS蛋白功能奠定了基础.
