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IL-1β对肠上皮细胞屏障通透性的影响
目的 炎症性肠病是儿童和青少年时期重要的慢性胃肠道疾病,肠黏膜屏障的损伤在其发病中起重要作用.本研究通过IL-β刺激Caco-2细胞单层,体外模拟炎症性肠上皮细胞屏障,为研究炎症性肠病的发病及治疗提供基础.方法 体外培养Caco-2细胞21d模拟肠上皮细胞单层屏障.炎症1组从培养第5天开始每隔1天应用IL-1β处理2h检测TEER值,至第21天.炎症2组于培养第18天换用含IL-1β培养液,分别于处理0、12、24、48、72 h检测TEER.正常对照组用普通培养液培养,也于相应时间点检测TEER.结果 正常对照组细胞TEER从第5天至第15天逐渐增加,在第15天达到600 Ω·cm2,并到达平台期保持至第21 d.炎症1组细胞TEER值均低于正常组细胞,并且直至第21天仍＜500 Ω·cm2.炎症2组细胞显示时间依赖性的TEER逐渐降低,在48 h达到大值,然后在72 h轻度回升.结论 培养2～3周的Caco-2细胞能够形成具有极性的肠上皮细胞单层,对其给予IL-1β刺激可在体外模拟炎症性肠上皮细胞屏障.
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血小板活化因子引起肠上皮细胞屏障非凋亡依赖性的通透性增高
目的 研究血小板活化因子(PAF)对肠上皮细胞屏障通透性的影响,并探讨其作用位点.方法 体外培养Caco-2细胞建立肠上皮细胞屏障模型.不同浓度PAF(0,50,100,200 nmol/L)作用24 h,应用TEER和荧光黄透过量检测肠上皮细胞屏障通透性;应用Annexin V和Hoechst染色,用荧光显微镜和流式细胞仪检测肠上皮细胞凋亡情况;透射电镜下观察紧密连接.结果 Caco-2细胞培养21 d左右可形成类似人肠黏膜上皮细胞屏障结构,给予50 nmol/L PAF即可引起TEER的下降和荧光黄透过率的增加,PAF100 nmol/L组肠上皮屏障通透性增加达到高峰,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).实验并未发现PAF引起明显的细胞凋亡增加,但透射电镜下出现了紧密连接的断裂和细胞超微结构的破坏.结论 PAF可直接引起肠上皮细胞屏障通透性增加,该作用是凋亡非依赖性的,作用位点在旁细胞途径.
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中度低温对肠上皮细胞屏障氧化应激损伤后分泌炎症因子的影响及其临床意义
目的：通过检测中度低温下肠上皮细胞屏障氧化应激损伤后炎症因子（ TNF-α、IL-1β、IL-6）的表达水平，阐明中度低温对其炎症因子表达的影响及其临床意义。方法：应用 Caco-2细胞株建立体外肠上皮细胞屏障模型，分中度低温组、常温组、亚低温组3个组，肠上皮细胞屏障氧化应激损伤后，应用逆转录 PCR 和实时荧光定量PCR 检测细胞内炎症因子 mRNA 的表达水平，ELISA 法检测培养上清中炎症因子的表达水平。结果：肠上皮细胞屏障氧化应激损伤后，中度低温组细胞内炎症因子的 mRNA 和以及培养上清中炎症因子的质量浓度明显低于常温组和亚低温组。结论：肠上皮细胞屏障氧化应激损伤后，中度低温比常温、亚低温更能抑制炎症因子的分泌，具有重要的临床意义。
关键词： 肠上皮细胞屏障 Caco-2 细胞株 中度低温 炎症因子
