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COX-2和Survivin在人成釉细胞瘤中的表达及其意义研究
目的 探讨COX-2和Survivin在人成釉细胞瘤(ameloblastoma,AB)中的表达及意义.方法 收集2010年3月至2012年10月在承德医学院附属医院口腔科行手术治疗的20例AB患者的肿瘤组织标本以及20例唇裂患者的正常唇红黏膜组织标本,采用蛋白质印记法(Western Blot)检测其中COX-2和Survivin的表达.采用SPSS19.0统计软件对数据进行分析.结果 AB中COX-2和Survivin的表达明显高于正常口腔黏膜,差异有统计学意义(P＜0.05),且COX-2和Survivin的表达呈正相关(r=0.778,P＜0.05).结论 COX-2和Survivin在AB中高表达,呈现一致性,且明显高于正常口腔黏膜;COX-2和Survivin可能与AB的发生发展有关.
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HoxB8对结直肠癌细胞生长迁移的影响
目的:通过构建过表达HoxB8基因的慢病毒表达载体,研究HoxB8基因对结直肠癌细胞生长迁移的影响.方法:采用PCR技术扩增出人HoxB8基因全长,通过限制性内切酶EcoR Ⅰ和SACⅡ双酶切,T4 DNA连接酶连接,克隆至慢病毒载体,构建Lenti-HoxB8-GFP重组载体.重组阳性克隆进行PCR和酶切鉴定,测序验证序列正确.将重组载体质粒以及3个辅助质粒共转染人肾上皮细胞(293T)进行慢病毒包装,收集病毒颗粒.然后将病毒颗粒感染结直肠癌细胞RKO,并将RKO细胞分为转染组(转染慢病毒重组质粒Lenti-HoxB8-GFP)、对照组(转染空白质粒Lenti-GFP)和空白对照组.RT-PCR和Western blot法检测病毒感染后HoxB8在细胞中的表达情况.MTT、平板克隆形成实验和Transwell小孔试验检测过表达HoxB8基因对结直肠癌细胞生长迁移的影响.结果:经鉴定显示重组载体质粒构建成功,测序正确.293T细胞高效包装Lenti-HoxB8-GFP慢病毒,携带HoxB8基因的慢病毒感染RKO细胞后可看到大量绿色荧光,RT-PCR和Western blot法检测分别证实HoxB8基因和蛋白在转染组细胞中呈高表达.实验组细胞的增殖和平板克隆形成能力高于空白组及对照组.Transwell小孔试验结果显示HoxB8高表达能够促进结直肠癌细胞的转移.结论:成功构建HoxB8慢病毒表达载体,过表达HoxB8能够促进结直肠癌细胞的增殖、克隆形成以及迁移.
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先天性巨结肠患儿肠道内Smoothelin的表达
目的 本研究旨在探讨先天性巨结肠(Hirschsprung's disease,HD)肠壁中Smoothelin(SM)的变化和临床意义. 方法 自2007年1月至2013年1月,随机选取53例经病理证实先天性巨结肠患儿术中切除的肠段样本(狭窄段即无神经节细胞段、移行段和扩张段即有神经节细胞段).男33例,女20例,年龄3月龄~4岁(平均年龄1.3岁).取材分别为狭窄段、移行段和扩张段肠壁组织各1.0cm3大小,迅速用pH7.4的PBS液冲洗,不同浓度的蔗糖溶液中脱水,-80℃保存.同时留取相同部位的肠壁组织做组织HE染色病理学检查外,辅以PGP9.5、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及S-100免疫组织化学染色,证实符合HD诊断.采用RealTime-PCR和免疫蛋白印记法方法从RNA和蛋白水平对SM在HD患儿肠道组织内的表达进行检测,并分析其参与HD发病过程的可能机制. 结果 SM mRNA表达在先天性巨结肠病扩张段、移行段和狭窄段分别为(27.13±16.44)×10-3、(21.60±10.02)×10-3和(19.66±9.92)×10-3;蛋白表达分别为43.13±12.44、36.83±9.43、23.63±4.97.移行段和狭窄段SM mRNA和蛋白均低于扩张段(P<0.05).结论 SM可能参与HD的发病过程.
