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MicroRNA-196a抑制序列对人胰腺癌PANC1细胞株HOXB8基因表达的影响
目的 观察microRNA-196a(miR-196a)抑制序列转染胰腺癌细胞株PANC1后对其HOXB8基因表达的影响.方法 将PANC1细胞分为对照组、miR-196a抑制序列组和siRNA对照组.采用脂质体法将miR-196a抑制序列及对照siRNA分别转染PANCI细胞.应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染细胞miR-196a及其下游靶基因HOXB8 mRNA和蛋白的表达.结果 转染miR-196a抑制序列后,PANC1细胞miR-196a表达量较siRNA对照组显著减少(0.050±0.054比0.839±0.025,t=3.12,P＜0.05)；HOXB8 mRNA表达量较siRNA对照组增高1.57倍(2.20 ±0.07比1.29±0.10,t=3.86,P＜0.05)；HOXB8蛋白表达量也显著增强(0.90±0.03比0.40±0.10,t=3.11,P＜0.05).结论 miR-196a可以下调HOXB8基因的表达.
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HoxB8对结直肠癌细胞生长迁移的影响
目的:通过构建过表达HoxB8基因的慢病毒表达载体,研究HoxB8基因对结直肠癌细胞生长迁移的影响.方法:采用PCR技术扩增出人HoxB8基因全长,通过限制性内切酶EcoR Ⅰ和SACⅡ双酶切,T4 DNA连接酶连接,克隆至慢病毒载体,构建Lenti-HoxB8-GFP重组载体.重组阳性克隆进行PCR和酶切鉴定,测序验证序列正确.将重组载体质粒以及3个辅助质粒共转染人肾上皮细胞(293T)进行慢病毒包装,收集病毒颗粒.然后将病毒颗粒感染结直肠癌细胞RKO,并将RKO细胞分为转染组(转染慢病毒重组质粒Lenti-HoxB8-GFP)、对照组(转染空白质粒Lenti-GFP)和空白对照组.RT-PCR和Western blot法检测病毒感染后HoxB8在细胞中的表达情况.MTT、平板克隆形成实验和Transwell小孔试验检测过表达HoxB8基因对结直肠癌细胞生长迁移的影响.结果:经鉴定显示重组载体质粒构建成功,测序正确.293T细胞高效包装Lenti-HoxB8-GFP慢病毒,携带HoxB8基因的慢病毒感染RKO细胞后可看到大量绿色荧光,RT-PCR和Western blot法检测分别证实HoxB8基因和蛋白在转染组细胞中呈高表达.实验组细胞的增殖和平板克隆形成能力高于空白组及对照组.Transwell小孔试验结果显示HoxB8高表达能够促进结直肠癌细胞的转移.结论:成功构建HoxB8慢病毒表达载体,过表达HoxB8能够促进结直肠癌细胞的增殖、克隆形成以及迁移.
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miR-196b和HoxB8在结直肠癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨结直肠癌组织中miR-196b和HoxB8的表达及临床意义.方法 选取2012年10月-2014年3月在该院手术治疗的47例结直肠癌患者为研究对象,术中留取结直肠癌组织及正常黏膜组织,应用实时荧光定量PCR技术检测二者miR-196b mRNA和HoxB8 mRNA表达情况,HoxB8蛋白表达检测应用Western blot,对检测结果进行统计学分析.结果 结直肠癌组织中miR-196b mRNA和HoxB8 mRNA表达量显著高于正常黏膜组织(P＜0.01),且结直肠癌中两者表达水平呈显著负相关(r =-0.462,P=0.012);miR-196b表达与肿瘤分期及淋巴结转移相关(P＜0.05),而HoxB8表达与结直肠癌临床病理特征不具有相关性(P ＞0.05).结论 结直肠癌组织中miR-196b及HoxB8表达水平显著升高,miR-196b不仅参与结直肠癌的发生发展,而且可能抑制HoxB8表达.
关键词： 结直肠癌 miR-196b HOXB8 PCR Western blot -
miR-196和HoxB8与结直肠癌Folfox4化疗敏感性的相关研究
目的 探讨结直肠癌患者术前接受Folfox4方案化疗对miR-196和HoxB8表达的影响,并探讨miR-196和HoxB8在结直肠癌组织中的表达差异以及与Folfox4方案化疗敏感性的相关性及其意义.方法 分别用荧光定量PCR技术和免疫组化技术检测新辅助化疗组(包括化疗敏感组与不敏感组)和未化疗组患者结直肠癌组织中miR-196和HoxB8的表达情况,分析二者在不同组间的表达差异及其相关性.结果 结直肠癌组织中miR-196和HoxB8 mRNA的相对表达量在新辅助化疗组分别为0.646 8±0.683 9和0.607 6±0.418 9,相比未化疗组的1.000 0±0.000 0和1.000 0±0.000 0均下降(P＜0.01);miR-196在化疗敏感组的表达相对量为0.948 9±0.691 0,高于不敏感组的0.344 7±0.536 1 (P＜0.01);HoxB8 mRNA在化疗敏感组的表达相对量为0.489 9±0.371 5,低于不敏感组的0.725 3±0.437 5 (P＜0.05);免疫组化结果提示化疗敏感组中HoxB8蛋白表达阳性率低于不敏感组(Z=-2.396,P=0.017).在新辅助化疗组和未化疗组中,miR-196和HoxB8 mRNA的表达均存在负相关关系(r =-0.595,P＜0.01;r=-0.435,P＜0.01).结论 术前Folfox4方案化疗可以降低miR-196和HoxB8在结直肠癌组织中的表达水平;miR-196和HoxB8的表达差异可能与结直肠癌患者对Folfox4方案的化疗敏感性相关,高表达的miR-196可能通过抑制HoxB8的表达水平从而增强Folfox4化疗的敏感性.
