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吉西他滨对Beclinl基因沉默的人胰腺癌MiaPaCa-2细胞的周期及凋亡的影响
目的 探讨吉西他滨对Beclinl基因沉默的人胰腺癌MiaPaCa-2细胞周期及凋亡的影响.方法 构建靶向Beclinl的siRNA,插入表达质粒,转染MiaPaCa-2细胞.采用RT-PCR法和蛋白质印迹法检测细胞Beclinl mRNA及蛋白的表达,应用吉西他滨处理Beclinl基因沉默的MiaPaCa-2细胞,应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡状况.结果 成功获得Beclin1基因沉默的MiaPaCa-2细胞,转染后细胞的Beclin1 mRNA表达量从对照组的1.0下降到0.295;S、G2期细胞数减少,而G1期细胞增多;细胞凋亡未受影响.应用吉西他滨处理后,Beclin1基因沉默的MiaPaCa-2细胞的S期细胞数进一步减少,而G1、G2期细胞增多,细胞凋亡被抑制.结论 Beclinl表达沉默使人胰腺癌细胞系MiaPaCa-2细胞周期发生改变,并影响吉西他滨对细胞周期及凋亡的作用.
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回转培养对静脉内皮细胞自噬的影响
目的 探讨回转器模拟失重对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cella,HUVEC)自噬的影响.方法 体外培养的HUVEC,在回转器模拟失重条件下培养48 h,同时设1 G静止培养为对照组.逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot方法检测Beclinl mRNA和蛋白的表达;透射电镜观察HUVEC超微结构.结果 回转模拟失重后HUVECBeclinl mRNA及蛋白表达显著高于对照组;回转48 h后细胞呈现自噬性改变.结论 回转模拟失重可以导致HUVEC自噬增加.
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YB-1抑制三氧化二砷诱导的胃癌细胞自噬机制
目的 研究YB-1抑制三氧化二砷(As2O3)诱导人胃癌BGC-823细胞自噬的机制.方法 采用脂质体转染siRNA干扰YB-1和腺病毒转染pAd1 Easy/YB-1过表达YB-1；实时荧光定量PCR检测Bcl-2和Beclinl基因转录；Western blot检测YB-1、Bcl-2、Beclin1、P62和LC3Ⅱ蛋白的表达；MDC染色、荧光显微镜观察自噬泡.结果 与空病毒(AdGFP)组相比,pAd1 Easy/YB-1(AdYB-1)组Bcl-2基因表达增高,而干扰质粒(siYB-1)组Bcl-2基因表达水平较空质粒(HK)组降低(P均＜0.05),各组Beclin1基因表达比较无统计学差异.与AdGFP和HK组相比,AdYB-1组Beclinl和LC3Ⅱ蛋白减少,Bcl-2和P62蛋白增加(P均＜0.01),siYB-1组Beclin1和LC3Ⅱ蛋白增加,Bcl-2和P62蛋白减少(P均＜0.01).与AdGFP组相比,AdYB-1组自噬泡聚集减少,加入Bcl-2抑制剂HA14-1后自噬泡重新聚集,Beclin1蛋白恢复表达,P62降解增加,LC3Ⅱ升高.结论 YB-1可能通过上调Bcl-2、抑制Beclin1,实现对As2O3诱导的BGC-823细胞自噬的抑制.
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Beclin1基因在SW620细胞自噬和凋亡中作用
目的 探讨Beclinl基因在SW620细胞自噬和凋亡中作用.方法 采用RNA干扰技术抑制Beclinl表达,Beclinl被抑制后细胞的存活能力通过MTT实验评估;结直肠癌细胞SW620在血清剥夺状态下自噬活性通过LC3蛋白水平评估;分别经血清剥夺、星孢菌素及依托泊苷处理的SW620凋亡率通过流式细胞仪检测;Beclinl表达情况经Western blot评估.结果 pSUPER-Becl组细胞血清剥夺后存活能力显著降低(P＜0.05),在血清剥夺24 h后,空白对照组和pSUPER-non组抗凋亡能力比pSUPER-Becl组更强(P＜0.05),星孢菌素处理后,pSUPER-Becl组细胞凋亡为显著(P＜0.05),用依托泊苷处理后得到相似的结果(P＜0.05);pSUPER-non组与空白对照组细胞中Beclinl的表达随血清剥夺时间的延长呈现上调趋势(P＜0.05),这与LC3的表达变化相一致;而pSUPER-Becl组LC3的表达显著减少(P＜0.05).结论 Beclin1是结直肠癌细胞中自噬和凋亡的关键调节因素,并且维持凋亡和自噬的平衡;Beclinl通过调节细胞自噬活性,在结直肠癌发展与演进中作为一种保护机制,使肿瘤细胞免受到低营养和化疗所致的损伤而持续生存.
