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11P型腺病毒文献资料
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含人血红素氧化酶-1重组11P型腺病毒的构建及体外表达
目的 构建含人血红素氧化酶-1重组11P型腺病毒,并使之转染人BJ细胞,测定其转染效率及目的 蛋白表达情况.方法 PCR目的 基因序列, 克隆成穿梭载体后转化大肠杆菌,扩增提取质粒,鉴定正确后与骨架载体重组,鉴定重组质粒正确并无野毒后在293细胞中扩增,CsCl密度梯度离心法纯化腺病毒. 按不同梯度MOI值感染成纤维细胞,根据绿色荧光强度检测其转染效率. 1周后用免疫组化方法检测目的 蛋白HO-1表达情况.结果 对重组腺病毒进行酶切和PCR鉴定,证实含人血红素氧化酶-1(HO-1)的11P型重组腺病毒构建成功,纯化后病毒滴度达到1.0×1010pfu/ml.通过免疫组化检测可在成纤维细胞中观察到胞浆内有棕褐色目的 蛋白阳性颗粒表达.结论 可以成功构建含人血红素氧化酶-1(HO-1)的11P型重组腺病毒并表达目的 蛋白.
