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吡格列酮对新生大鼠成骨细胞p38和ERK1/2信号通路的影响
目的 观察吡格列酮对新生大鼠成骨细胞增殖、凋亡及分化的影响,并初步探讨相关分子机制.方法 获取新生大鼠颅骨成骨细胞,应用倒置显微镜观察并通过茜素红染色鉴定.将第3代成骨细胞接种至含不同浓度吡格列酮(0、10、20、40 μmol/L)的培养基中培养.应用MTT实验检测成骨细胞活性.应用Hoechst33258染色检测细胞凋亡.应用碱性磷酸酶(ALP)活性检测和钙结节染色评估吡格列酮对成骨细胞分化能力的影响.应用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹评估吡格列酮对成骨细胞内BMP-2、Runx2、OSX等成骨分化相关基因和蛋白表达的影响.应用蛋白免疫印迹评估p38和ERK1/2信号通路内相关蛋白表达情况.结果 随着吡格列酮(0、10、20、40 μmol/L)浓度的增加,各组细胞活性逐渐降低(F=282.629,P＜0.01).与空白对照组(0μmol/L)相比,经10、20 μmol/L吡格列酮处理组荧光阳性成骨细胞数量减少(P＜0.05).与空白对照组及吡格列酮10μmol/L组、20 μmol/L组相比,吡格列酮40 μmol/L组荧光阳性成骨细胞数量显著增多(P＜0.05).随着吡格列酮(0、10、20、40 μmol/L)浓度的增加,各组细胞ALP活性逐渐降低(F=64.247,P＜0.01).随着吡格列酮浓度的增加,钙化结节数量逐渐增多(F=672.644,P＜0.01).与空白对照组相比,经10、20、40 μmol/L吡格列酮处理后,细胞内BMP-2、Runx2、OSX mRNA和蛋白表达水平均以剂量依赖形式显著降低(P＜0.05).与空白对照组相比,经10、20、40 μmol/L吡格列酮处理后,细胞内p-p38 MAPK蛋白表达水平均显著增加(P＜0.05),而p-ERK1/2蛋白表达水平显著降低(P＜0.05).各组细胞内p-JNK蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 吡格列酮以剂量依赖的方式调节大鼠成骨细胞增殖、凋亡和分化,且p38信号通路活化和ERK1/2信号途径抑制在这一过程中起重要调控作用.
关键词： 吡格列酮 成骨细胞 P38信号通路 ERK 1/2信号通路 细胞凋亡 -
紫草素诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其机制的研究
目的 研究紫草素(shikonin,SK)诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其作用机制.方法 不同浓度紫草素作用于肺腺癌A549细胞后,CCK-8法检测细胞的增殖情况;DAPI荧光染色法和FCM检测细胞凋亡;Western blotting检测紫草素处理48 h后Bax、Bcl-2、p-Akt、p-ERK1/2的蛋白水平.结果 紫草素显著抑制肺腺癌A549细胞的增殖活性(P＜0.05),诱导细胞凋亡,与空白对照组比较,紫草素处理组Bax表达上调(P＜0.05),Bcl-2、p-Akt、P-ERK1/2表达下调(P＜0.05).结论 紫草素可以显著抑制肺腺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与线粒体凋亡途径,PI3K/Akt信号通路和ERK 1/2信号通路有关.
