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耳后腺文献资料
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中华大蟾蜍耳后腺全长cDNA文库的构建
目的 构建中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans)耳后腺全长cDNA文库.方法 采用TRIzol法提取耳后腺总RNA,经亲和色谱纯化获得总mRNA.以总mRNA为模板,利用In-Fusion(R)SMARTerTM Directional cDNA Library Construction Kit获得初始文库,测定文库滴度、重组率及插入片段长度.随机选取211个克隆进行测序.结果 初始文库的滴度为1.3 ×109 cfu·L-1,重组率90%,插入片段大小分布为0.4~4.0 kbp,平均片段大小约为1.1 kbp.共获得180个表达序列标签(expressed sequence tag,EST).结论 此方法所构建文库各项指标均符合要求,为从功能基因组水平研究中华大蟾蜍耳后腺的基因表达及其功能奠定基础.