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吸水链霉菌井冈变种原生质体的制备与再生
目的 研究井冈霉素产生菌吸水链霉菌井冈变种的原生质体制备与再生的佳条件.方法 使用溶菌酶水解菌体细胞壁法,分别考察影响吸水链霉菌井冈变种原生质体的制备与再生的各种因素.结果 在R2YE液体培养基中.一级菌丝体的佳培养时间为24 h,二级菌丝体的佳培养时间为16 h,佳甘氨酸质量浓度为5 g·L-1,佳溶菌酶质量浓度为2 g·L-1,佳酶解时间为60 min,佳再生培养基为R2YE,原生质体的再生率高可达到15.79%.结论 本实验确定了吸水链霉菌井冈变种的原生质体制备与再生的佳条件,能够得到较高的再生率.
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诺西肽产生茵活跃链霉菌的原生质体制备与再生
目的 研究诺西肽产生菌活跃链霉菌的原生质体制备与再生的适条件.方法 使用溶菌酶脱去细胞壁制备原生质体,并考察原生质体制备和再生的各种影响因素.结果 确定了原生质体制备的条件:一级培养采用种子培养基,培养30 h,转种量的体积分数为5%;二级培养采用R2YE培养基,培养时间为32 h,适甘氨酸质量浓度为6.0 g·L-1,佳溶菌酶质量浓度为1.5 g·L-1,酶解时间为60 min,原生质体再生率达到5.3%.结论 上述条件为活跃链霉菌原生质体制备与再生的适条件,该条件的建立为活跃链霉菌原生质体的诱变育种奠定了基础.
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柱晶白霉素产生菌的原生质体制备、再生和诱变
目的:对柱晶白霉素产生菌SK-06的原生质体制备和再生的条件,以及再生菌的产生抗生素能力进行了研究.方法:考察甘氨酸浓度对菌丝生长的影响,摸索和确定溶菌酶酶解的佳条件,考察再生培养基的组成.结果:溶菌酶酶解的佳条件为:2 mg/ml、30℃、90 min.再生率达到15%.通过二次再生后,获得了一株高产菌株,效价提高了238%.经过紫外线诱变的孢子和原生质体的效价提高了95%和160%.结论:原生质体制备和再生选育高产菌株是一种有效的菌种选育手段.
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原生质体再生法选育耐自身代谢产物的卡那霉素链霉菌高产菌株
以卡那链霉菌株KA01为出发菌株，酶法制备原生质体，在含有高浓度的卡那霉素的培养基再生或经UV诱变处理后再生，从再生菌落中分离突变菌株。从中获得一高产突变株KA02，其摇瓶相对效价比出发株提高18％，大罐生产水平提高8％。
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黄色短杆菌原生质体制备与再生条件的研究
目的 研究高产谷氨酰胺的黄色短杆菌原生质体制备和再生的佳条件.方法 用青霉素和甘氨酸预处理黄色短杆菌后,用溶菌酶酶解,研究菌龄、青霉素和甘氨酸预处理浓度及时间、酶浓度、酶解时间、酶解温度等条件对原生质体制备和再生的影响.结果 原生质体制备和再生的佳条件为:预处理处于对数生长早期的黄色短杆菌,青霉素适浓度0.4 u/mL,甘氨酸浓度2％,预处理时间2h,酶浓度1 mg/mL,酶解时间12h,酶解温度37℃.结论 在佳条件下原生质体形成率达99.71％,再生率达16.52％.
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盐霉素产生菌原生质体的制备与再生
为获得盐霉素产生菌的原生质体制备与再生的佳条件,本文考察了影响盐霉素产生菌原生质体制备与再生的各种因素.结果表明,盐霉素产生菌的原生质体制备与再生的佳条件为:菌丝体培养基选择为R2YE,一级菌丝体佳培养时间为22h,二级菌丝体佳培养时间为18h,佳蔗糖的添加量为100g/L,佳甘氨酸质量浓度为5g/L,菌丝体在酶解前要经玻璃珠打碎,佳溶菌酶质量浓度为4g/L,佳酶解温度为33℃,佳酶解时间为60min.原生质体制备与再生条件经优化后,盐霉素产生菌的原生质体释放率可达95％,原生质体再生率可达17％.较高的原生质本制备率与再生率使得利用原生质体技术进行微生物菌种选育成为可能,同时,这种成熟的原生质体制备与再生工艺,确保了经原生质体诱变育种后发生基因突变的遗传个体绝大部分都是纯合体,从而避免了高产性状经传代后发生性状回复的现象,为盐霉素工业生产菌种的选育工作奠定了基础.
