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中空海藻酸钙固定化白色链霉菌转化去氢表雄酮的研究
目的 利用生物转化方法来生产具有抗氧化和抗肿瘤活性药物羟基化去氢表雄酮.方法 利用中空海藻酸钙胶囊对白色链霉菌进行固定化,然后用此固定化菌对甾体类药物去氢表雄酮(DHEA)进行生物转化,并对固定化菌的转化条件进行优化,以期获得高产量的羟基化DHEA.结果 中空海藻酸钙胶囊制备的固定化白色链霉菌对DHEA 具有转化作用,并且可以通过固定化白色链霉菌的二次转化来实现羟基化DHEA 产率的提高,我们同时获得了固定化白色链霉菌的优转化条件:对生长两天的白色链霉菌进行固定化,温度35℃,pH 值7.0,转速150 r/min,转化时间3 d.结论 采用固定化白色链霉菌转化DHEA 方法可行,而且此种方法具有广泛的工业应用价值.
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原生质体紫外诱变高通量选育盐霉素高产菌
以白色链霉菌(Streptomyces albus) S-610为出发菌株,利用溶菌酶水解菌丝体细胞壁获得原生质体,然后进行紫外诱变,并通过高通量筛选再生突变株.结果显示,当UV照射原生质体20 s时,细胞正突变率大为24.5％,此时致死率为86.4％.经高通量筛选和摇瓶验证,终筛得3株遗传稳定的高产菌S-612、S-620和S-622,产盐霉素能力较出发菌株S-610分别提高了57.6％、45.5％和69.7％.
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ε-聚赖氨酸的发酵培养基优化
目的:获得ε-聚赖氨酸产生菌的佳发酵培养基.方法:以白色链霉菌N31-69菌株为研究对象,以各种碳源、氮源、无机盐为主要考察因素,分析各因素对ε-聚赖氨酸合成的影响,确定佳碳源和佳氮源.在单因素试验的基础上进行正交试验,确定佳发酵培养基.结果:佳发酵培养基组成份(％):葡萄糖3,(NH4)2SO40.7,K2 HPO4 0.08,KH2 PO4 0.17,MgSO4·7H2O 0.07,ZnSO4·7H2O 0.012,FeSO4·7H2O 0.003,酵母浸出粉0.7.N31-69菌株在佳发酵培养基中,ε-聚赖氨酸摇瓶发酵产量达1.519 g/L,比优化前产量提高了28.0％.结论:今后在发酵罐上进一步进行发酵优化提高产量,为ε-聚赖氨酸产业化打下基础.
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一种简便的ε-聚赖氨酸产生菌的筛选方法
目的:建立一种简便、灵敏的ε-聚赖氨酸(ε-PL)产生菌的筛选方法.方法:利用产正电分泌物的菌株和美蓝之间的静电作用而形成独特的透明圈,从而灵敏地筛选得到产正电分泌物的菌株;利用Dragendorff试剂与生物碱特有的颜色反应,从菌株中筛选,得到3株生物碱产生菌.结果:对产生物碱的菌株发酵液进行ε-PL含量分析,确定1株ε-PL高产菌Z-18.结论:经鉴定Z-18为白色链霉菌.
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白色链霉菌盐霉素生产工艺分析
以白色链霉菌SL F2 110为产生菌,着重从菌种选育和补料工艺两方面研究提高白色链霉菌的盐霉素产量.
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一种低场核磁共振技术快速定量检测发酵液油浓度方法
建立了一种方便、快捷和无损的低场核磁共振(LF-NMR)技术检测发酵液中油的方法.通过对培养基中各成分的检测,确定了油脂的弛豫时间约100ms;单因素实验表明除了黄豆粉和胚芽粉造成取样不均对油峰面积有一定的影响,其他成分对油峰面积无明显影响;含油量不同的梯度实验结果表明了LF-NMR检测油时有良好的稳定性(相对偏差约为4.4％)和精确性(约1.0％);正己烷萃取法测定油浓度与LF-NMR法测定的油浓度进行线性相关分析,相关性良好(R2=0.9581).因此,应用LF-NMR检测发酵液中油浓度比传统的检测方法(如正己烷萃取法等)更方便和准确,可应用于工业发酵监控.
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盐霉素产生菌原生质体的制备与再生
为获得盐霉素产生菌的原生质体制备与再生的佳条件,本文考察了影响盐霉素产生菌原生质体制备与再生的各种因素.结果表明,盐霉素产生菌的原生质体制备与再生的佳条件为:菌丝体培养基选择为R2YE,一级菌丝体佳培养时间为22h,二级菌丝体佳培养时间为18h,佳蔗糖的添加量为100g/L,佳甘氨酸质量浓度为5g/L,菌丝体在酶解前要经玻璃珠打碎,佳溶菌酶质量浓度为4g/L,佳酶解温度为33℃,佳酶解时间为60min.原生质体制备与再生条件经优化后,盐霉素产生菌的原生质体释放率可达95％,原生质体再生率可达17％.较高的原生质本制备率与再生率使得利用原生质体技术进行微生物菌种选育成为可能,同时,这种成熟的原生质体制备与再生工艺,确保了经原生质体诱变育种后发生基因突变的遗传个体绝大部分都是纯合体,从而避免了高产性状经传代后发生性状回复的现象,为盐霉素工业生产菌种的选育工作奠定了基础.
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盐霉素自身抗性高产突变菌株筛选
目的 筛选出具有自身次级代谢产物盐霉素(salinomycin)抗性并且遗传稳定性好的菌株,提高摇瓶效价.方法 采用常规化学试剂甲基磺酸乙酯诱变处理盐霉素生产菌株Streptomyces albusS-13孢子,通过系列salinomycin浓度梯度平板进行筛选.结果 获得了比生产对照菌株高38％的突变株S-E-6.传代实验表明:S-E-6具有较好的遗传稳定性.同时,通过对盐霉素梯度筛选突变株的单菌落直径与效价进行了统计分析,结果表明突变株菌落直径与盐霉素效价具有正相关特性,线性相关系数(R2)为0.95.
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提高白色链霉菌盐霉素产量的工艺研究
以白色链霉菌SL-F2-110为产生菌,着重从菌种选育和补料工艺两方面研究提高白色链霉菌的盐霉素产量.结果 表明,①氯化锂前处理与紫外线复合处理后筛选出的突变株盐霉素发酵产量有很大提高;②在基础培养基中减少豆油加量,采用中间补豆油控制,发酵水平与没有补料的相比有较大提高.
