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应用头孢吡肟纸片法对革兰氏阴性杆菌进行SSBL阳性菌株筛选及其临床意义
产超超广谱β-内酰胺酶(SsBL)细菌即细菌同时产生超广谱β-内酰胺酶(Extended spectrum betalactamases,ESBLs)和质粒型头孢菌素酶(AmtpC),因此产SSBL的菌株耐药性更强,治疗更为棘手.
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结核病药效评价用结核分枝杆菌参考菌株的筛选
目的 筛选结核病(tuberculosis,TB)药效评价用结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)国家参考菌株.方法 取169株MTB临床分离株,采用结核杆菌生长指示管(mycobacterial growth indicator tube,MGIT)960液体培养基,对4种一线抗TB药物[链霉素(streptomycin,STR)、异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampin,RFP)和乙胺丁醇(ethambutol,EMB)]进行药敏试验,并对耐INH和/或耐RFP的菌株的相关耐药基因位点进行测序,确认突变位点;用间隔区寡核苷酸分型法(Spoligotyping)对所有菌株进行基因分型,多位点可变数量串联重复序列分型方法(mutiple loci VNTR analysis,MLVA)对北京家族MTB临床分离株进行基因分型.结果 169株MTB临床分离株中耐STR 118株,INH 143株,RFP 129株,EMB 95株,耐多药(至少对NIH和RFP耐药)120株,单耐INH 5株,单耐RFP7株,四种抗TB药均敏感共11株.143株INH耐药菌株中,katG基因突变菌株占76.9％,inhA基因突变菌株占27.3％,aphC基因突变菌株占25.2％,至少2个基因发生突变的菌株有31株;129株RFP耐药菌株中,rpoB基因531位点发生突变,占67.4％,526位发生突变,占17.8％,516位点发生突变,占16.3％,至少2个位点发生突变的菌株有10株.169株MTB临床分离株分为北京家族和非北京家族,北京家族111株;非北京家族58株,主要有CAS家族2株,EAI家族7株,H家族11株,LAM家族6株,MANU家族6株,T家族7株,U家族1株,X3家族3株,还有15株在数据库中未表现的新基因型.111株北京家族MTB临床分离株分为4大群,其中Ⅱ群分布广,占68.5％,代表性好.筛选出耐多药菌株27株,敏感菌株5株,单耐异烟肼2株,单耐利福平3株.结论 成功筛选出敏感菌株、单耐药菌株、MDR菌株作为候选菌株.
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产双功能褐藻胶裂解酶菌株的筛选与初步研究
目的:双功能褐藻胶裂解酶既能降解聚β-D-甘露糖醛酸,又能降解聚α-L-古罗糖醛酸,可以用一种酶来制备不同结构的褐藻胶寡糖.本文的目的是筛选能产生双功能褐藻胶裂解酶的菌株,对其产酶曲线和降解产物作初步研究.方法:利用唯一碳源培养基筛选产生褐藻胶裂解酶的菌株,通过16S rDNA序列比对进行菌种鉴定,通过在凝胶上检测褐藻胶裂解酶活性来判断发酵上清液中褐藻胶裂解酶的数量及分子量,利用薄层层析确定降解褐藻胶的终产物组成.结果:从褐藻上筛选到一株海洋细菌QY107,鉴定为弧菌属细菌.发酵120 h对褐藻胶裂解酶产量为12.32 U/mL,其发酵液上涛中只含有一种褐藻胶裂解酶,分子量在28 kDa左右,并且对聚β-D-甘露糖醛酸和聚α-L-古罗糖醛酸都能降解,降解褐藻胶的终产物主要为三糖.结论:本文筛选到一株弧菌QY107,其发酵液上清中只有一种双功能褐藻胶裂解酶,可用于大量制备褐藻胶三糖.推测该酶具有特殊的催化腔结构,对其结构与功能相互关系的研究可能会发现新的底物结合与催化机制.酶解制备褐藻胶寡糖因其环保高效而越来越受到人们的重视,因此该菌株能促进海洋寡糖类生物制品的开发,在医药、食品、农业、生物燃料等领域具有广阔的应用前景.
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R(-)-扁桃酸脱氢酶产生菌的筛选
选用酵母、乳酸菌、粪链球菌、假丝酵母等4个种属18种菌株,研究其对苯乙酮酸和苯乙酮酸甲酯的不对称还原催化特性.筛选出一株酵母sp.strain by1,对两种底物皆具有较高的转化活性和光学选择性.底物浓度为10mmol/L,微生物转化72 h后,扁桃酸的得率80.83%,对映体过量值e,e.达95.5%;微生物转化28 h后,扁桃酸甲酯的得率92.11%,e.e.值达91.1%.
关键词： R(-)-扁桃酸 R(-)-扁桃酸甲酯 生物转化 菌株筛选 -
一株碱性α-淀粉酶产生菌的筛选及产酶条件优化
目的 获取工业生产上有潜在应用价值的碱性淀粉酶产生菌.方法 土壤中筛选出5株产淀粉酶的菌株;经正交试验确定培养基的优组成;通过摇瓶发酵初步确定了发酵条件.结果 产淀粉酶活性高的为来源于草地土壤的菌株SⅡ-6,它在发酵8 h时产酶能力强:优化后的培养基为玉米粉3%,蛋白胨0.8%,磷酸氢二钠0.6%,硫酸铵0.2%,氯化铵0.15%,pH 9.0.于40℃,180r/min条件下培养,菌株SⅡ-6酶活性可达到2 114U/mI,.结论 筛选出5株产淀粉酶的菌株,其中菌株SⅡ-6是1株耐碱性α-淀粉酶产生菌.
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一种简便的ε-聚赖氨酸产生菌的筛选方法
目的:建立一种简便、灵敏的ε-聚赖氨酸(ε-PL)产生菌的筛选方法.方法:利用产正电分泌物的菌株和美蓝之间的静电作用而形成独特的透明圈,从而灵敏地筛选得到产正电分泌物的菌株;利用Dragendorff试剂与生物碱特有的颜色反应,从菌株中筛选,得到3株生物碱产生菌.结果:对产生物碱的菌株发酵液进行ε-PL含量分析,确定1株ε-PL高产菌Z-18.结论:经鉴定Z-18为白色链霉菌.
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青春双歧杆菌耐氧菌株的筛选及生长条件研究
目的:通过自制培养基筛选耐氧双歧杆菌,并对此菌的生长特性进行研究.方法:将耐氧菌株接种于自制的增菌培养基和胰蛋白胨大豆肉汤培养基中,分别在CO2、需氧环境中37 ℃培养,于不同时间取样测定吸光值,绘制生长曲线,对细菌进行平板计数并对其形态菌落进行观察.结果:耐氧双歧杆菌在CO2、需氧环境中均能生长,但生长速度、高活菌数、形态和菌落特征不同,在CO2环境中生长较好.结论:耐氧双歧杆菌在CO2、需氧环境中均能生长.
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一种快速筛选巴氏毕赤酵母高表达克隆的新方法
目的:为了准确、快捷地筛选到高表达的毕赤酵母工程菌株.方法:利用毕赤酵母的生理特点和免疫印迹的特异性,将转化子接种到MM板上至形成克隆,贴上NC膜,待NC膜被分泌产物湿润后,揭下NC膜,进行ELISA-dot鉴定,选出高表达克隆进行扩增、培养,并作SDS-PAGE和Western blotting进一步确定.结果:该法的筛选结果与SDS-PAGE和Western blotting相符.结论:与传统方法相比,该法具有高通量,快速,简便的优点,适合毕赤酵母工程菌株的筛选.
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三种异喹啉型生物碱的微生物转化筛选
目的 异喹啉型生物碱是生物碱的重要组成部分,药用价值高,本文拟筛选对3种四氢异喹啉型生物碱ZI(巴马亭)、Z2(番荔枝宁)、Z3(瑞枯灵)具有催化活性的微生物菌株,为后期通过微生物催化方法进行3种生物碱的结构修饰提供依据.方法 以微生物菌株为酶催化剂,将作为底物的3种异喹啉型生物碱与18种微生物菌株共培养,3～5d后乙酸乙酯萃取发酵液,通过薄层色谱法(TLC)对转化反应进行筛选;Z1和Z2两种底物转化能力均较强的菌株03-L-93-Ⅱ通过ITS区序列进行种属鉴定.结果 经筛选的8株真菌、10株细菌中,03-L-93-Ⅱ、T002、T009、T016、T017具有转化Z1(巴马亭)的能力,T002、T009、T017、03-L-93-Ⅱ具有转化Z2(番荔枝宁)的能力,菌株L125-4对Z3(瑞枯灵)表现出微弱的转化活性.对菌株03-L-93-Ⅱ经分子生物学方法鉴定为Xylariales.Sp.结论 微生物菌株作为催化剂对四氢异喹啉型生物碱进行结构改造是可行的.
关键词： 生物转化 异喹啉型生物碱 菌株筛选 薄层色谱法(TLC) -
北虫草的菌株筛选、驯化及液体发酵培养的研究
目的:通过对北虫草菌株的筛选、驯化及液体发酵优化培养条件的研究,终优选出的北虫草液体菌种适宜培养条件为:葡萄糖1.0％;蚕蛹粉1.0％;玉米粉2.0％;KH2PO40.15％;MgSO40.06％;VB12片;pH值6.结论:采用液体发酵菌种培养北虫草,液体接种后,从北虫草子实体生长状况看,子实体长势好,长势速度快,且产量高,性状稳定.
