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聚合酶链反应快速检测念珠菌属
病原真菌因具有特殊的细胞壁结构,故聚合酶链反应 (PCR)检测方法自建立以来一直需要经过反复的真菌破壁和 DNA抽提过程才能获取提纯的 DNA,以进行下一步的 PCR检测 [1- 3]。近来有学者已使用基因释放剂、 CTAB及异硫氰酸胍等 [4- 6]对真菌菌株或临床标本进行前期处理,然后进行 PCR检测,但这仍需要配制复杂的原生质体形成缓冲液、原生质体裂解缓冲液 [6]等,或者高额购买商品化的基因释放剂 [4,5],这不仅需要较高的技术要求、较大的实验成本、经过一定训练的技术人员,还要历经较长的实验时间,严重限制了真菌病 PCR检测方法在临床的应用和普及。因此我们以念珠菌属作为突破口,对其破壁—破膜—释放 DNA系列程序的条件及相应的 PCR扩增体系作了反复研究,终获得了一种简便、快速的 PCR检测方法,现介绍如下。
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柱晶白霉素产生菌的原生质体制备、再生和诱变
目的:对柱晶白霉素产生菌SK-06的原生质体制备和再生的条件,以及再生菌的产生抗生素能力进行了研究.方法:考察甘氨酸浓度对菌丝生长的影响,摸索和确定溶菌酶酶解的佳条件,考察再生培养基的组成.结果:溶菌酶酶解的佳条件为:2 mg/ml、30℃、90 min.再生率达到15%.通过二次再生后,获得了一株高产菌株,效价提高了238%.经过紫外线诱变的孢子和原生质体的效价提高了95%和160%.结论:原生质体制备和再生选育高产菌株是一种有效的菌种选育手段.