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转移DNA文献资料
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利用电转化和三亲杂交方法高效转化根癌农杆菌
目的探索根癌农杆菌的高效转化方法.方法考察质粒经电击转化法转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens LBA4404)的影响因素,并优化其转化条件;研究采用三亲杂交方法,将带有vgb基因簇的重组质粒pYG308导入A. tumefaciens LBA4404;经PCR扩增反应进行验证.结果外加电场强度和脉冲时间是决定电转化效率的关键因素,两者适当组合才可获得高转化效率;采用对数期中期的细菌和提高细菌浓度均可提高转化效率.用三亲杂交方法转化A.tumefaciens LBA4404,可得到较高的转化效率.所获抗性转化子的质粒DNA酶切图谱正确.结论 带有双元载体(含vgb基因)的根癌农杆菌构建成功.
