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利福霉素酶的分离纯化及主要性质
利福霉素SV发酵液经盐析和透析后,再经DEAE52和Sephadex G-100进一步分离纯化,获得聚丙烯酰胺疑胶电泳均一的利福霉素酶,该酶适反应温度为30～35℃,酶活性的适pH值在7.0～7.5之间,其分子质量为2.8×104,由单一亚基组成.酶的氨基酸组成测试结果表明此酶含有咪唑基、巯基和α-氨基3个常见的活性功能团,而且每个酶分子中含有1个铜离子,为一金属酶.
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利用均匀实验优化利福霉素SV发酵培养基氮源配比
应用均匀设计的方法对利福霉素SV发酵培养基中的氮源配比进行优化.研究了氮源中各成分对发酵效价的影响,确定各成分的佳配比并用实验验证,使摇瓶发酵效价提高了10%以上,并对利福霉素SV产生菌在新、老培养基中的代谢特性进行了比较.
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地中海拟无枝酸菌原生质体电融合及其在提高利福霉素SV发酵效价中的应用
对产利福霉素SV的地中海拟无枝酸菌(Amycolatopsis mediterranei)原生质体进行热灭活和紫外灭活标记,其热灭活条件为52℃,1.5h,紫外灭活条件为紫外线照射(15W,25cm,270nm)60min.将双灭活标记的原生质体用CRY-3型细胞融合仪进行电融合,得出:成串电流频率1.5MHz,电压58V,成串时间20s,融合脉冲幅宽80μS,融合电压500V,融合槽间距0.5mm时,融合率高为9.3×10-4.对筛选的融合子产量试验表明,50%以上的融合子产量高于出发菌株,有明显的正变作用,将融合子在利福霉素代谢类似物平板上分离纯化,获得了化学效价提高30%以上的产量稳定菌株.
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利用具有pH检测控制和补料功能的新型摇床研究利福霉素SV种子培养
本文利用具有pH检测控制与补料功能的新型摇床,得到了利福霉素SV种子的适接种量范围为6%～8%(V/V)及适移种时间为对数生长期末期(判断标准为pH到达第二个低谷),并建立了预测菌体浓度的数学模型.检验证明此模型能够较准确地预测利福霉素SV产生菌在对数生长期及移种时(对数生长期末期)的菌浓,并可用于预测在一定接种量下达到预定菌浓所需的培养时间.本模型在适宜的接种量范围内准确度较高,但随接种量的偏离程度的增加准确度有所减小;另外本模型只在培养基成份、培养环境等条件不变时适用,否则模型参数需重新估计.
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利福霉素钠原料及其注射剂杂质谱分析
目的:探讨利福霉素钠原料和注射剂的杂质控制策略.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent Zorbax SB C18(4.6mm×250 mm,5μm),以0.39％磷酸二氢钠溶液(pH 7.5)-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,柱温35℃,检测波长254 nm,进样量20 μL;通过破坏性试验、影响因素试验、配伍试验、加速试验以及原料和制剂杂质谱的测定,分析利福霉素钠原料和注射剂的杂质来源及其影响因素.结果:利福霉素钠原料的有关物质主要为利福霉素S和未知杂质1、2、3、5、6,注射剂的有关物质主要为未知杂质1、2、3,其中6为降解杂质,利福霉素S和未知杂质1、2、3和5为固有杂质,另外有很多含量较少的其他未知杂质,杂质谱比较恒定.破坏性试验、影响因素试验和加速试验表明温度是影响杂质含量的重要因素.结论:通过对利福霉素钠及其注射剂杂质谱的研究,分析了杂质的来源及其影响因素,可以有目的地控制一些杂质,为质量控制提供参考;同时可以分析其样品来源,为日常质量监督提供参考.
