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利福霉素B发酵过程中巴比妥钠加量的优化
目的 优化利福霉素发酵摇瓶中巴比妥钠的添加量及添加策略,以提高发酵产量.方法 采用摇瓶发酵,优化巴比妥钠初始含量及中间补加策略,通过测定发酵液中利福霉素B的效价及菌体浓度来确定合适的发酵工艺.结果 巴比妥钠添加的优化策略为:初始浓度0.05%,72 h补加至0.1%,120 h补加至0.15%.结论 优化工艺使发酵单位显著提高,比不加巴比妥钠提高17%,比目前生产水平提高10%以上.
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地中海拟无枝酸菌原生质体电融合及其在提高利福霉素SV发酵效价中的应用
对产利福霉素SV的地中海拟无枝酸菌(Amycolatopsis mediterranei)原生质体进行热灭活和紫外灭活标记,其热灭活条件为52℃,1.5h,紫外灭活条件为紫外线照射(15W,25cm,270nm)60min.将双灭活标记的原生质体用CRY-3型细胞融合仪进行电融合,得出:成串电流频率1.5MHz,电压58V,成串时间20s,融合脉冲幅宽80μS,融合电压500V,融合槽间距0.5mm时,融合率高为9.3×10-4.对筛选的融合子产量试验表明,50%以上的融合子产量高于出发菌株,有明显的正变作用,将融合子在利福霉素代谢类似物平板上分离纯化,获得了化学效价提高30%以上的产量稳定菌株.
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产利福霉素地中海拟无枝酸菌的电转化条件优化
目的 为了获得较高的地中海拟无枝酸菌的转化率,进行了电转化条件的优化.方法 以大肠埃希菌-拟无枝酸菌穿梭质粒pULVK1-Am为载体,地中海拟无枝酸菌为受体菌,考察了收集菌体时期、细胞壁弱化方式、电击缓冲液和电击参数等因素对转化率的影响.结果 以0.1μg/mL氨苄西林处理细胞,A600为0.7～0.8时收集菌体,用溶菌酶-LiAc-DTT溶液于37℃孵育30min,去离子水作电击缓冲液,7.5kV/cm、25μF、750W下进行电击,转化率高可达到9.23×104CFU/μg质粒DNA.结论 只有将不同机制的3种细胞壁弱化剂组合起来对拟无枝酸菌进行处理时,才能得到较高的转化率.
