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颗粒状角膜营养不良一家系BIGH3基因突变的研究
目的 对1个颗粒状角膜营养不良家系进行分子遗传学分析,探讨其BIGH3基因突变的类型.方法 收集1个颗粒状角膜营养不良家系中2名患者和1名正常成员的外周血5 ml,提取白细胞DNA,利用合成的BIGH3基因第4、11和12外显子的特异性引物,进行PCR扩增,并对PCR产物直接行DNA测序分析.结果 该家系患者成员的BIGH3基因第4外显子存在CGC>CAC(R124H)突变杂合子.而家系表现正常成员无此基因位点突变.结论 该颗粒状角膜营养不良家系存在BIGH3基因突变,为R124H杂合突变类型,确诊为Avellino角膜营养不良.
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BIGH3R555W突变转基因小鼠模型的建立
目的 建立BIGH3R555W突变转基因角膜营养不良小鼠模型.方法 构建以磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate kinase,PGK)为启动子的BIGH3 (M)-IRES-EGFP重组质粒载体,通过原核显微注射方法将线性化、纯化后的外源质粒注射入C57小鼠受精卵中,胚胎移植入假孕受体母鼠输卵管内,获得子代小鼠.用PCR方法检测子代鼠尾基因组DNA,通过RT-PCR及Western印迹法检测BIGH3R555w基因表达.结果 8只假孕小鼠共移植注射后的胚胎84枚,出生35只子代鼠,经PCR检测得到4只转基因阳性小鼠.RT-PCR和Western印迹法检测结果显示,BIGH3R555W在转基因小鼠角膜表达量明显增多.结论 通过显微注射法使外源基因BIGH3R555W突变体在小鼠基因组中整合,成功建立了BIGH3R555W突变转基因小鼠模型,该模型可为今后进一步研究角膜营养不良疾病的发病机制提供依据.
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一颗粒状角膜营养不良家系BIGH3基因突变的研究
目的：对一颗粒状角膜营养不良( GCD )家系进行BIGH3基因突变筛查,以确定其致病基因。方法收集一常染色体显性遗传的GCD家系,提取该家系患者及正常者的DNA,通过聚合酶链式反应( PCR)扩增BIGH3基因的目的片段,纯化后直接测序,用DNAStar软件分析测序结果,检测其BIGH3基因突变的类型。结果该家系患者均检测出第4外显子的R124H突变(CGC>CAC),而家系中的正常者及50例正常对照者的BIGH3基因中均未发现该突变。家系成员都检测出第11、12外显子的同义单核苷酸多态性( SNP)。通过基因检测,确定该家系角膜营养不良的分型,即为GCDⅡ型,又称Avellino角膜营养不良( ACD)。结论 BIGH3基因突变导致了该家系角膜营养不良患者的角膜病变,突变类型为R124H杂合突变。
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BIGH3相关性角膜营养不良的分子遗传学研究进展
BIGH3相关性角膜营养不良是临床上一种较常见的致盲性遗传眼病,大多为单基因常染色体显性遗传.其防治的关键在于通过揭示更多BIGH3基因的突变位点及其相关发病机制,以提供准确的临床诊断和基因治疗.近年来的研究表明,位于BIGH3基因4、11、12、14号突变位点外显于上的突变类型可能通过改变其表达蛋白(KE蛋白)的结构、诱导凋亡、影响蛋白的黏附爬行功能等机制引起角膜异常蛋白沉积而致病.就目前国内外该病分子遗传学方面的研究做一简要综述.
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两种角膜营养不良的 BIGH3基因突变研究
目的了解中国角膜营养不良患者所存在的 BIGH3基因突变类型. 方法应用聚合酶链反应并结合DNA测序技术,分别对3例颗粒状角膜营养不良和12例Avellino角膜营养不良患者以及10名正常人 BIGH3基因第4外显子和第12外显子进行突变检测. 结果所检测的角膜营养不良患者均存在 BIGH3基因突变,所有正常对照无 BIGH3基因突变.其中12例为R124H突变杂合子,3例为R555W突变杂合子. 结论颗粒状、Avellino角膜营养不良分别存在 BIGH3基因R555W及R124H突变,而R124H突变相关的Avellino角膜营养不良在 BIGH3基因突变所导致的角膜基质营养不良中为常见.124和555密码子亦是中国角膜营养不良患者 BIGH3基因的突变热点.
