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SELDI筛选绒癌耐氨甲喋呤细胞株耐药相关蛋白
目的 应用飞行时间质谱技术结合蛋白芯片分析筛选人绒毛癌细胞株JAR及其与人绒毛癌耐氨甲喋呤细胞株JAR/MTX之间的蛋白质表达差异,寻找出绒癌耐药的相关蛋白.方法 采用体外细胞培养来提取两种细胞的胞浆蛋白和分泌蛋白,应用SELDI-TOF-MS技术检测各细胞株提取的胞浆蛋白和分泌蛋白,采用CM-10型弱阳离子交换芯片检测.结果 经SELDI技术检测发现质荷比(m/z)为8132.043,10738.36的胞浆蛋白在JAR/MTX细胞中呈高表达;质荷比(m/z)为11555.09的分泌蛋白及m/z为4896.68的胞浆蛋白在JAR细胞中高表达,在JAR/MTX中呈低表达.结论 应用飞行时间质谱技术结合弱阳离子交换芯片,可有效筛选绒癌耐氨甲喋呤细胞株中的特异性表达蛋白;寻找到的差异蛋白与绒癌耐药密切相关,并可能成为本病耐药的标志物.
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RT-PCR及激光共聚焦检测人绒毛和绒癌细胞中AE2的表达
目的 探讨在人正常绒毛细胞和绒癌JAR细胞中阴离子交换蛋白2(AE2,Anion Exchanger2)的表达差异及意义.方法 以RT-PCR技术及免疫荧光激光共聚焦技术检测人正常绒毛滋养细胞和绒毛膜癌细胞株JAR细胞膜上AE2的表达.结果 ①在人绒毛滋养细胞与人绒癌JAR细胞株中,均检测到AE2mRNA的表达.绒癌组AE2的OD值为(0.85±0.21);正常组AE2的OD值分别为(0.19±0.01).绒癌组AE2的OD值明显高于正常组(P<0.05).②免疫荧光激光共聚焦实验证实AE2在绒癌组呈红色阳性表达,在正常组中未见红光,当加强激发强度后,仍可探及AE2在正常组的表达.结论 AE2在绒癌中表达异常升高,可能引起滋养细胞内水电解质平衡紊乱,导致绒癌发生.