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C蛋白耦联受体40文献资料
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GPR40反义RNA对胰岛β细胞内Ca2+浓度及胰岛素分泌的影响
目的 应用反义RNA技术特异性下调胰岛β细胞G蛋白耦联受体(GPR40)的表达,观察其对胰岛β细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)及胰岛素分泌的影响.方法 体外分离SD大鼠胰岛β细胞,将GPR40反义RNA表达载体pcDNA3.1(+)-GPR40(-)用脂质体体外瞬时转染胰岛细胞,Western blot检测GPR40蛋白的表达,将1.0 mmol/L游离脂肪酸(软脂酸∶油酸=2∶1)与胰岛细胞共培养10,30,60 min,进行高葡萄糖刺激胰岛素释放试验,利用荧光探针Fura-2/AM,测定胰岛细胞[Ca2+]i变化,放射免疫法检测培养液中胰岛素浓度变化.结果 与对照组和空白质粒转染组比较,GPR40反义RNA可显著降低细胞GPR40蛋白的表达水平(P＜0.05),在各作用时间点,GPR40反义RNA转染组[Ca2+]i显著低于对照组(P＜0.05),同时GPR40反义RNA转染组胰岛细胞的胰岛素分泌明显低于对照组(P＜0.05).结论 GPR40介导游离脂肪酸刺激β细胞内[Ca2+]i升高和胰岛素分泌.
