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3D3/LYRIC文献资料
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小鼠3D3/LYRIC基因重组质粒构建及蛋白表达和定位
目的 构建小鼠3D3/LYRIC真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位.方法 提取小鼠乳腺上皮细胞系C127的mRNA,反转录为cDNA.PCR扩增m3D3/LYRIC全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体中.将构建的重组质粒测序并转染到腺样囊性癌细胞系ACC-2中,提取细胞蛋白进行Western blot检测.利用免疫荧光显微镜观察pEGFP-m3D3/LYRIC在腺样囊性癌ACC-2细胞内的定位.结果 m3D3/LYRIC全长基因序列克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小为1740 bp.Western blot检测到融合蛋白GFP-m3D3/LYRIC表达,分子量约为91 kDa.pEGFP-C1-m3D3/LYRIC主要在细胞质内定位,在细胞核内未见表达.结论 成功构建了m3D3/LYRIC全长基因真核表达载体,pEGFP-m3D3/LYRIC蛋白主要定位于细胞质内.
