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葡萄糖调节蛋白78对L858R突变的非小细胞肺癌erlotinib敏感性的影响
目的 观察葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)对L858R突变非小细胞肺癌对erlotinib敏感性的影响.方法 应用基因转染技术干预H3255细胞中GRP78及其突变体的表达,应用MTT方法检测erlotinib对细胞增殖的抑制情况,应用流式细胞术和FITC-TUNEL分析凋亡情况,应用免疫印迹技术检测表皮生长因子受体(EGFR)、细胞外信号调节激酶(ERK)的表达及磷酸化水平.结果 过表达GRP78及其多肽结合结构域删除的突变体降低H3255细胞对erlotinib的敏感性,抑制erlotinib诱导的细胞凋亡,促进EGFR、ERK的磷酸化.结论 GRP78通过其ATPase结构域促进非小细胞肺癌细胞对erlotinib耐药.
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转染EGFRL858R的肺腺癌细胞中IL-6和VEGF表达水平及其意义
目的:探讨肿瘤细胞癌基因表皮生长因子受体(EGFR) L858R型突变与肺腺癌恶性转移患者癌细胞中白细胞介素6(IL-6)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的关系及其意义.方法:将含EGFRL858R全长基因质粒的载体转染EGFR野生型肺腺癌细胞系H460(EGFRL858R-H460组),空载体转染H460细胞作为对照组(Vec-H460组),QRT-PCR法检测2组细胞中IL-6和VEGF mRNA表达水平.将含IL-6 siRNA的载体转染带有EGFRL858R型突变的细胞系H1975(IL-6 siH1975组),转染空载体的H1975细胞作为对照组(Vec-H1975组),QRT-PCR法检测2组细胞中IL-6和VEGF mRNA表达水平,Western blotting法检测2组细胞中VEGF蛋白表达水平.结果:与Vec-H460组比较,EGFRL858R-H460组细胞中IL-6和VEGF mRNA表达水平明显升高(P＜0.01);与Vec-H1975组比较,IL-6 siH1975组细胞组IL-6和VEGF mRNA表达水平明显降低(P＜0.01),VEGF蛋白表达强度明显降低.结论:肺腺癌细胞系中EGFRL858R型突变可升高肺腺癌患者癌细胞中IL-6和VEGF mRNA表达水平,其中IL-6 mRNA水平升高可能是VEGF mRNA表达水平升高的原因,这些变化可能是EGFRL858R型突变参与肺腺癌恶性转移进程的途径之一.
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电离辐射降低NSCLC细胞株T790M突变所致TKI耐药
背景与目的以表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）为靶点的分子靶向治疗在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）的治疗中发挥重要的作用。EGFR突变的患者对EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-tyrosine kinase inhibitor, EGFR-TKI）治疗敏感、疗效显著，但无论近期疗效如何，患者终都不可避免地产生耐药。大量研究证实，EGFR基因的二次突变（T790M）是患者耐药的主要原因。本研究旨在探讨电离辐射对NSCLC细胞株T790M突变所致EGFR-TKI耐药的影响。方法选择NSCLC细胞株H1975和H3255为研究对象，实时荧光定量PCR法检测两株细胞的突变状态、克隆形成实验观察两株细胞的放射敏感性，MTT法检测各处理组两株细胞对EGFR-TKI的抗药性。结果 H1975为T790M+L858R双突变株、H3255是仅有L858R的单突变株；各处理组H1975及H3255的存活分数未见明显差异（P=0.952），提示T790M突变对NSCLC细胞株的放射敏感性无影响；2.5 Gy X线辐射组，H1975的 IC50为（0.678,2±0.373）μmol/L，较0 Gy对照组的（3.520±0.821）μmol/L明显下降，差异有统计学意义（P=0.008），H1975相较于H3255的抗药性也从85.9倍下降为39.2倍。结论电离辐射可降低NSCLC细胞株T790M突变所致的TKI耐药，本实验的研究结果为后续的体内和临床研究提供了研究依据；EGFR-TKI治疗期间联合放射治疗对克服T790M突变介导的耐药性有望成为一种有希望的治疗策略。
