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A族链球菌表面新发现蛋白Fba真核表达质粒的构建及其诱导的免疫应答
目的:构建新发现的A族链球菌(GAS)表面蛋白Fba的真核表达质粒,并将其以及Fba蛋白、M蛋白分别免疫小鼠,对它们诱导的体液免疫及细胞免疫应答进行评价分析.探讨Fba蛋白作为GAS候选疫苗的可能性.方法:以SSI-9菌株(GAS M1血清型标准株)作为模板,采用PCR方法扩增Fba基因,测序正确后克隆至真核表达质粒pcDNA3.1,构建真核表达质粒pcDNA3.1/fba;将雌性CD1小鼠随机分成6组,分别为Fba蛋白免疫组、M蛋白免疫组、pcDNA3.1/fba+Fba蛋白免疫组、pcDNA3.1/fba免疫组、pcDNA3.1空质粒对照及PBS对照组.ELISA检测各免疫组血清IgG的动态变化水平;脾细胞增殖试验检细胞增殖水平,并用流式细胞术检测小鼠体内CD4+、CD8+淋巴细胞的变化.试验结果经SPSS10.0统计处理.结果:成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1/fba;质粒或蛋白免疫后小鼠IgG产生水平以Fba蛋白免疫组增高为明显,其次为Fba质粒蛋白混合免疫组及Fba质粒组.特异性抗原诱导后体外脾细胞增殖试验显示:pcDNA3.1/fba免疫组增殖水平明显高于其它组,流式细胞检测结果与此一致,并显示以CD4+T细胞水平升高为主,CD8+T细胞水平在各组别之间也有一定的差异.结论:(1)Fba蛋白与M蛋白一样均能有效地诱导机体产生抗体,提示Fba蛋白很有希望成为GAS的候选疫苗.(2)成功构建了Fba蛋白的真核表达质粒pcDNA3.1/fba,且该重组质粒能有效地诱导抗链球菌所需的抗体,并能增强CD4+T 细胞、CD8+ T细胞的增殖功能.
关键词： A族链球菌(GAS) Fba蛋白 真核表达质粒 免疫 -
A族链球菌多价疫苗的完善制备及其动物免疫保护作用研究
目的:完善A族链球菌(GAS)多价疫苗并探究其免疫保护效果.方法:构建GAS的多肽疫苗F7M6,将其中的M6多肽克隆作为对照,表达纯化后,将两种蛋白连同本室保存的GAS M1蛋白分别免疫小鼠,末次免疫后10 d,半数小鼠行ELISPOT检测IL-4和IFN-γ,ELISA检测各组的IgG、IgG1、IgG2a;同时,以F7M6蛋白为诊断抗原检测其与抗链"O"阳性人血清的特异性结合;致死量的M1GAS攻毒并计算存活率.结果:无论是诱导细胞免疫,还是诱导抗体产生,F7M6组的水平均为高;攻毒后F7M6蛋白的生存率为66.7%.F7M6蛋白检测抗链"O"阳性血清的阳性检出率为95%.结论:GAS的多肽疫苗F7M6能诱导特异性细胞和体液免疫应答,对GAS感染具有良好的保护效果,且F7M6的多价表位涵盖于时下流行的大部分GAS的血清型中.
关键词： A族链球菌(GAS) 多价疫苗 M蛋白 FbaA蛋白 免疫应答
