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膜表达型InsB15－23 H－2 Kd dtSCT对NOD 小鼠1型糖尿病发病的影响
目的：研究膜表达型InsB15－23 H－2Kd dtSCT对NOD小鼠1型糖尿病发病率的影响。方法：用InsB15－23 mdtSCT真核表达载体皮下免疫3周龄NOD 母鼠，连续监测NOD小鼠的血糖水平以判断小鼠的发病情况。通过连续切片对NOD小鼠胰岛单个核细胞浸润情况进行检测，并监测IGRP206－214特异性CTLs的变化，来阐明InsB15－23 mdtSCT分子影响1型糖尿病病程的细胞学机制。结果：InsB15－23 mdtSCT组小鼠30周龄时的发病率（9％）显著低于空质粒组（60％）和自然发病组（80％），胰岛单个核细胞浸润情况也较轻，但16和40周龄时两组小鼠外周血IGRP206－214特异性CTLs水平无差异。结论：InsB15－23 mdtSCT真核表达载体能降低NOD小鼠1型糖尿病发病率，并且这种免疫保护作用是IGRP206－214非依赖性的。
关键词： 二硫键捕获型单链三聚体 CD8+T细胞 1型糖尿病 NOD小鼠 -
应用dtSCT技术制备低亲和力抗原肽InsB15-23肽的MHCⅠ四聚体
目的 制备低亲和力InsB15-23抗原肽的MHCⅠ四聚体.方法 应用二硫键捕获型单链三聚体(disulfide-trap singlechain trimer,dtSCT)技术,将InsB15-23抗原肽、小鼠β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)和H-2Kd分子以柔性接头(linker,L)依次连接,并在抗原肽的C末端与H-2Kd分子间引入了二硫键,以提高抗原肽与H-2Kd分子结合的稳定性.融合基因克隆入pET-22b原核表达载体,经过诱导表达、洗涤包涵体、稀释复性等步骤获得单体,生物素化后制成InsB15-23 dtSCT型四聚体.结果 我们比较了自制InsB15-23 dtSCT四聚体和商品化G9V传统五聚体对小鼠外周血特异性CTLs的检出率.2种多聚体对阴性对照Balb/c小鼠都显示出很低的非特异性标记水平,都能检出4周龄NOD母鼠外周血中低水平的InsB15-23特异性CTLs,且二者的检出率无统计学差异.结论 我们成功制备出稳定的InsB15-23dtSCT型四聚体.与商品化的传统五聚体相比,我们自制的四聚体具有类似的检出率和低非特异性标记水平.
关键词： MHCⅠ四聚体 二硫键捕获型单链三聚体 CD8+T细胞 低亲和力抗原肽
