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基因沉默RhoC联合雷帕霉素对肝癌细胞侵袭和转移影响的实验研究
目的:通过基因沉默RhoC联合雷帕霉素阻断mTOR通路对肝癌细胞侵袭和转移影响的实验研究,证明二者联合能显著抑制肝癌侵袭、迁移,寻找治疗肝癌的新分子靶点.方法:RhoC-siRNA质粒转染BEL7402细胞,荧光显微镜检测转染效率;Western blot方法鉴定RhoC的基因沉默效果.实验分为6组:空白对照BEL7402组、阴性对照Scramble-siRNA组、阴性对照Scramble-siRNA+ Rapa组、Rapa组、RhoC-siRNA组、RhoC-siRNA+ Rapa组.采用半定量RT-PCR法检测侵袭相关因子MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2、P27RF-Rho以及凋亡相关因子Survivin表达;免疫细胞化学法检测MMP2、MMP9的表达;采用划痕实验,细胞黏附实验,Transwell小室检测细胞的侵袭转移.结果:Scramble-siRNA+Rapa组、Rapa组、RhoC-siRNA组MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2、p27RF-Rho、Survivin和空白对照BEL7402组、阴性对照Scramble-siRNA组比较表达降低(P<0.05),RhoC-siRNA联合Rapa组的表达显著降低(P<0.01);Scramble-siRNA+ Rapa组、Rapa组、RhoC-siRNA组抑制肝癌细胞侵袭和迁移(P<0.05),而RhoC-siRNA联合Rapa组显著抑制肝癌细胞的侵袭迁移(P<0.01).结论:RhoC-siRNA联合雷帕霉素能显著抑制肝癌细胞的迁移、侵袭,是治疗肝癌的良好分子靶点.
关键词: siRNA沉默RhoC 雷帕霉素 细胞侵袭和迁移 -
TWEAK调控巨噬细胞外泌体中miRNA-7的表达抑制卵巢癌细胞侵袭和迁移的研究
目的·检测TWEAK刺激后,巨噬细胞及其分泌的外泌体中miRNA-7的表达;探索TWEAK刺激后,巨噬细胞源性外泌体抑制上皮性卵巢癌细胞(HO8910-PM)侵袭和迁移的机制.方法·收集TWEAK刺激前后的巨噬细胞源性外泌体,并将其与HO8910-PM细胞共培养,real-time PCR检测巨噬细胞、巨噬细胞源性外泌体和共培养后HO8910-PM细胞中miRNA-7的表达;Western blotting检测共培养后HO8910-PM细胞中EGFR/AKT/ERK l/2信号通路的表达;AntagomiR-7处理降低巨噬细胞中miRNA-7表达后,收集TWEAK刺激前后的外泌体并进行transwell侵袭和迁移实验,观察HO8910-PM细胞侵袭和迁移能力的变化.结果·TWEAK刺激后,巨噬细胞内及其外泌体中miRNA-7的表达升高,并可上调HO8910-PM细胞中miRNA-7的表达,下调EGFR信号通路的表达.预先下调巨噬细胞中miRNA-7的表达后,巨噬细胞源性外泌体和共培养后HO8910-PM细胞中miRNA-7的表达降低,TWEAK刺激的巨噬细胞源性外泌体原先抑制HO8910-PM细胞转移的作用得到恢复.结论·miRNA-7在TWEAK刺激巨噬细胞分泌的外泌体中发挥重要作用,可通过抑制上皮性卵巢癌细胞中EGFR信号通路抑制其侵袭和迁移.
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NF-κB信号通路参与miR-183抑制结肠癌细胞侵袭和迁移性研究
目的 探讨miR-183抑制结肠癌细胞SW620侵袭和迁移能力的作用是否需要NF-κB信号通路的参与性研究.方法 采用脂质体转染细胞,高表达或沉默miR-183基因和Ezrin基因,用Western blot分析细胞核内p65蛋白表达的改变,用Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化.结果 在结肠癌SW620细胞中,高表达miR-183的靶基因Ezrin蛋白的表达,细胞核内NF-κB亚基p65蛋白的表达上调;抑制Ezrin蛋白的表达,能够抑制p65的表达.高表达miR-183能够抑制细胞核内p65蛋白的表达;抑制miR-183的表达,细胞核内p65的表达上调.p65蛋白的细胞核内定位特异性抑制剂PDTC能够抑制由于miR-183降低或Ezrin蛋白表达上调引起的细胞侵袭和迁移能力改变.结论 miR-183抑制结肠癌细胞SW620侵袭和迁移能力的作用需要NF-κB信号通路的参与.